靶向siglec-10蛋白的多肽及免疫调控应用制造技术

本发明专利技术公开了靶向siglec

【技术实现步骤摘要】
靶向siglec
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10蛋白的多肽及免疫调控应用


[0001]本专利技术属于免疫治疗领域(包含激活免疫抗肿瘤)，涉及靶向siglec
‑
10蛋白的多肽及免疫调控应用。

技术介绍

[0002]免疫系统是人体抵抗外来细菌、病毒等外来病原菌的重要系统，具有免疫监视、防御、调控的作用。免疫细胞(树突状细胞、NK细胞、粒细胞、T细胞和B细胞等)功能的调控对于维持免疫功能具有重要作用。唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(sialic acid
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binding immunoglobulin
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like lectin，Siglec)可介导细胞与细胞或病原体间的相互作用，其家族成员参与免疫细胞活化、增殖以及凋亡的调控，参与免疫耐受的调控，在自身免疫病、炎症反应以及肿瘤发生中发挥重要的免疫调控作用。
[0003]Siglec
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10，人源细胞中的唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素10，小鼠同源物为Siglec G，广泛在B细胞、T细胞、树突状细胞和巨噬细胞上表达，在其胞质结构域中带有ITIM(基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序)结构，是一种免疫抑制性受体，在免疫细胞信号传导中起关键作用。Siglec10与可溶性CD52结合后可以通过削弱主要的组织相容性复合物I类
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肽复合物的形成以及与T细胞受体相关的激酶Lck和ZAP
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70的磷酸化来抑制T细胞的增殖和活化。2019年Barkal AA等在Nature发表论文报道，卵巢癌和三阴性乳腺癌中高表达的CD24可以结合到巨噬细胞表面Siglec10从而发挥“别吃我”的信号，逃脱机体的免疫监控。肿瘤细胞上的CD24和免疫细胞上的siglecc
‑
10相互作用导致了抑制信号级联。siglec
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10的IgV结构域与位于CD24末端的唾液酸结合，导致细胞内ITIM或ITIM样基序诱导Src家族激酶。这些激酶使细胞质中的ITIM酪氨酸磷酸化，然后招募酪氨酸磷酸酶如SHP
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1和SHP
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2来减少信号转导。
[0004]总结以上研究可知，
①
Siglec10表达在T细胞表面，与可溶性CD52结合，可以抑制T细胞的增殖和活化；
②
Siglec10表达在巨噬细胞表面，与卵巢癌和三阴性乳腺癌中高表达的CD24可以结合，发挥“别吃我”的信号，介导肿瘤的免疫逃逸。可见，Sigec
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10在免疫细胞功能调节中具有关键作用，已成为发展免疫疗法治疗广泛疾病的潜在目标。针对靶点Siglec10开发药物，可能对于治疗巨噬细胞、T细胞功能失调相关疾病具有重要意义。

技术实现思路
：
[0005]本专利技术的目的是针对现有治疗策略的不足，提供5种靶向siglec
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10蛋白的多肽。
[0006]本专利技术的另一目的是提供5条多肽的应用。
[0007]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0008]靶向siglec
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10的多肽，选自一下所示的任意一条多肽：
[0009]多肽pep
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MSH：MSHHYPHRGLHK(SEQ ID No.5)。
[0010]多肽pep
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YLL：YLLAVGRSLKQD(SEQ ID No.1)；
[0011]多肽pep
‑
HFV：HFVKTPARWAWG(SEQ ID No.2)；
[0012]多肽pep
‑
MGS：MGSHMHRHPKTF(SEQ ID No.3)；
[0013]多肽pep
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WGY：WGYPHSWLWARS(SEQ ID No.4)。
[0014]其中多肽pep
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YLL和pep
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HFV是针对siglec
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10特定序列1AYGYWFKAVTETTKGAPV)筛选到的；多肽pep
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MGS、pep
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WGY和pep
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MSH是针对siglec
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10特定序列2(DGRFWIRVQESVMVPEGLC)筛选到的。
[0015]所述的靶向siglec
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10的多肽在制备封闭巨噬细胞siglec
‑
10功能的药物中的应用。
[0016]所述的靶向siglec
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10的多肽在制备封闭T淋巴细胞siglec
‑
10功能的药物中的应用。
[0017]所述的靶向siglec
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10的多肽在制备免疫活化药物中的应用。
[0018]作为本专利技术的一种优选，所述的靶向siglec
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10的多肽在制备促进T淋巴细胞、巨噬细胞免疫活化的药物中的应用。
[0019]所述的靶向siglec
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10的多肽在制备乳腺癌、卵巢癌免疫治疗药物中的应用。
[0020]所述的靶向siglec
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10的多肽在制备CD24
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siglec
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10互作障碍相关疾病药物的应用。
[0021]所述多肽的获得可按照氨基酸序列通过固相合成方法获得；或者通过宿主微生物或细胞内克隆并表达携带编码所述多肽之一的核苷酸序列的DNA片段，通过现有的重组DNA技术制备获得。所使用的表达载体和宿主细胞均为重组技术为公众所知的。表达载体例如pET载体、pGEX载体；宿主细胞例如大肠杆菌(E.coli)，放线菌(Actinomycetes)，芽孢杆菌(Bacillus)，链霉菌(Streptomyces)。
[0022]有益效果：
[0023]噬菌体多肽库来源的5条多肽，是针对Siglec10特异性序列筛选获得的，均含有12个氨基酸，目前尚无5条多肽的功能。序列分别为：YLLAVGRSLKQD、HFVKTPARWAWG、MGSHMHRHPKTF、WGYPHSWLWARS、MSHHYPHRGLHK。在5条多肽添加生物素，结合验证试验表明多肽均可以结合siglec10蛋白。在细胞培养过程中，用多肽处理，可以显著促进肿瘤患者巨噬细胞和T淋巴细胞的功能，还可以促进巨噬细胞对卵巢癌细胞以及乳腺癌细胞的吞噬作用。因此，该5条多肽具有免疫调控作用，可以在制备抗自身免疫病和抗肿瘤相关药物中应用。
附图说明：
[0024]图1生物素标记的多肽可以与蛋白siglec
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10结合
[0025]图2流式检测多肽显著促进巨噬细胞对卵巢癌细胞的吞噬作用
[0026]图3流式检测多肽显著促进巨噬细胞对乳腺癌细胞的吞噬作用
[0027]图4噬菌体多肽促进卵巢癌患者巨噬细胞产生炎症性细胞因子
[0028]图5噬菌体多肽促进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向siglec
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10的多肽，选自以下任意一条多肽：多肽pep
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MSH：SEQ ID No.5；多肽pep
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YLL：SEQ ID No.1；多肽pep
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HFV：SEQ ID No.2；多肽pep
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MGS：SEQ ID No.3；多肽pep
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WGY：SEQ ID No.4。2.权利要求1所述的靶向siglec
‑
10的多肽在制备封闭巨噬细胞siglec
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10功能的药物中的应用。3.权利要求1所述的靶向siglec
‑
10的多肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵树立，吕明明，曾诚，刘新建，张梦洁，舒畅，李海洋，
申请(专利权)人：南京市第一医院，
类型：发明
国别省市：