一种检测转基因苜蓿的引物对组合、试剂盒及检测方法技术

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测转基因苜蓿的引物对组合、试剂盒及检测方法。所述引物对组合其核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.18所示；通过本申请的引物组合，操作简单，经过一次样品前处理，单管PCR扩增，文库构建与测序就可以同步检测多样品或一个样品中多种转基因成分，具有平行分析和多重判断的特点，大大提升了转基因产品的检测效率，节约了检测成本。节约了检测成本。节约了检测成本。

【技术实现步骤摘要】
一种检测转基因苜蓿的引物对组合、试剂盒及检测方法


[0001]本申请涉及生物
，尤其涉及一种检测转基因苜蓿的引物对组合、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]苜蓿是一种豆科多年生牧草，具备高营养、高产量、适应力强等特点。同时，苜蓿是一种高蛋白，因蛋白质含量高、含多种矿物元素、维生素和碳水化合物丰富以及能进行生物固氮等优点，在农牧业生产中发挥着重要的作用，具有很高的经济和生态价值。
[0003]传统的栽培方法具有时间长，产量低，成本高的局限性，无法满足现今社会对于育种多元化的需求。随着转基因技术的不断发展，植物转基因技术在苜蓿的遗传改良中具有极高的应用价值，从根本上加大育种进程，提高生产产量以及质量。但是转基因苜蓿被直接或间接地制成食品以及国际社会对转基因产品安全性问题的日益关注，农产品中的转基因成分检测已纳入国内外检验检疫部门的检测项目并逐渐得到加强。因此，开发高效、便捷的转基因食品检测技术显得至关重要。
[0004]转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。目前基于核酸的PCR检测方法仍是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，其主要包括普通定性PCR、巢式PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、荧光定量PCR多重PCR等方法。相对于普通定性PCR方法，巢式PCR高了检测的灵敏度，容易造成假阳性。LAMP操作简单、特异性强，然而引物设计较为复杂，容易造成DNA污染，影响后续的实验。荧光定量PCR方法具有重复性好、灵敏度高、核酸交叉污染少的优点，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。普通的多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但一般不超过6重，否则引物之间干扰较大，影响检测效果。基因芯片和数字PCR技术也是常用的转基因产品检测技术，它们均具有高通量、灵敏度高、特异性强等优点，且可平行检测1个转基因作物中多个基因或同时检测多种转基因作物；然而其成本高昂，需要专门的仪器设备，要求操作人员具有较高的专业素质，这些因素限制了该技术在检测中的广泛应用。
[0005]因此研发一种高效、灵敏和通量高的转基因产品检测方法，成为亟待解决的关键问题。

技术实现思路

[0006]本申请提供了一种检测转基因苜蓿的引物对组合、试剂盒及检测方法，以解决基于定量PCR技术检测转基因苜蓿通量低且检测成本高的技术问题。
[0007]第一方面，本申请提供了一种检测转基因苜蓿的引物对组合，所述引物对组合包括：
[0008]特异性扩增p35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示；
[0009]特异性扩增t35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4所示；
[0010]特异性扩增pNOS的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6所示；
[0011]特异性扩增tNOS的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示；
[0012]特异性扩增pFMV35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9至SEQ ID NO.10所示；
[0013]特异性扩增PAT的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.12所示；
[0014]特异性扩增bar的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.13至SEQ ID NO.14所示；
[0015]特异性扩增NPtII的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.15至SEQ ID NO.16所示；
[0016]和/或，特异性扩增cp4epsps的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.17至SEQ ID NO.18所示。
[0017]可选的，所述引物对组合还包括特异性扩增选自下组的苜蓿转基因品系的引物对：Ms_J163和/或Ms_J101。
[0018]可选的，所述引物对组合还包括：
[0019]特异性扩增Ms_J163的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.19至SEQ ID NO.20所示；
[0020]和/或，特异性扩增Ms_J101的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.21至SEQ ID NO.22所示。
[0021]可选的，所述特异性扩增Ms_Acc的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.23至SEQ ID NO.24所示。
[0022]可选的，所述引物对组合还包括特异性扩增选自下组的苜蓿转基因元件的引物对：p35S、t35S、pNOS、tNOS、pFMV35S、PAT、bar、NPtII和cp4epsps。
[0023]第二方面，本申请提供了一种检测转基因苜蓿的引物对组合的试剂盒，所述试剂盒包括：第一方面所述的引物对组合。
[0024]可选的，所述试剂盒还包括多重PCR预混液。
[0025]可选的，所述试剂盒还包括第一容器，所述第一容器内含有所述引物对组合。
[0026]第三方面，本申请提供了第一方面所述的引物对组合用于检测转基因苜蓿的方法，所述方法包括以下步骤：
[0027]得到待测苜蓿的DNA和所述引物对组合；
[0028]以所述DNA为模板，将所述引物对组合加入反应体系中，进行扩增反应，得到扩增产物；
[0029]将所述扩增产物进行高通量测序，得到高通量文库；
[0030]将所述高通量文库中的基因序列进行分析，得到检测转基因苜蓿的结果。
[0031]第四方面，苜蓿引物对组合的用途，所述引物对组合用于制备并检测苜蓿转基因成分和转基因品系；
[0032]所述引物对组包括序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.24所示的引物。
[0033]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0034]本申请实施例提供的检测转基因苜蓿，包括转基因成分和转基因品系的引物组合，所述引物对组合所述引物对组合其核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.18所示；通过本申请的引物组合，操作简单，经过一次样品前处理，单管PCR扩增，文库构建与测序就可以同步检测多样品或一个样品中多种转基因成分，具有平行分析和多重判断的特点，大大提升了转基因产品的检测效率，节约了检测成本。
附图说明
[0035]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。
[0036]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0037]图1为本申请实施例提供的一种全面检测转基因苜蓿的试剂盒的检测方法的流程示意图。
具体实施方式
[0038]为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测转基因苜蓿的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括：特异性扩增p35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2所示；特异性扩增t35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4所示；特异性扩增pNOS的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6所示；特异性扩增tNOS的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示；特异性扩增pFMV35S的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9至SEQ ID NO.10所示；特异性扩增PAT的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.12所示；特异性扩增bar的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.13至SEQ ID NO.14所示；特异性扩增NPtII的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.15至SEQ ID NO.16所示；和/或，特异性扩增cp4epsps的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.17至SEQ ID NO.18所示。2.根据权利要求1所述的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合还包括特异性扩增选自下组的苜蓿转基因品系的引物对：Ms_J163和/或Ms_J101。3.根据权利要求2所述的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括：特异性扩增Ms_J163的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.19至SEQ ID NO.20所示；和/或，特异性扩增Ms_J101的引物对，...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖华锋，李论，彭海，方治伟，陈利红，李甜甜，高利芬，周俊飞，万人静，
申请(专利权)人：江汉大学，
类型：发明
国别省市：