一种人源ATP合成酶的纯化方法技术

本发明专利技术属于蛋白纯化技术领域，具体涉及一种人源ATP合成酶的纯化方法。本发明专利技术提供了一种人源ATP合成酶的纯化方法，制备人源线粒体粗提物，溶膜，得线粒体总蛋白溶液；通过阳离子交换柱、阴离子交换柱及凝胶排阻色谱柱的手段分离纯化人源ATP合成酶。本发明专利技术提供的纯化方法具有操作方法简单，实验成本低，时长短的特点，得到的人源ATP合成酶蛋白纯度高，生理活性好，可用于后续的结构功能及药物发现研究。可用于后续的结构功能及药物发现研究。可用于后续的结构功能及药物发现研究。

【技术实现步骤摘要】
一种人源ATP合成酶的纯化方法


[0001]本专利技术属于蛋白纯化
，具体涉及一种人源ATP合成酶的纯化方法。

技术介绍

[0002]ATP合成酶是生物体合成能量货币ATP的蛋白复合物，是氧化磷酸化系统最后也是最重要的一员，能够将电子传递链复合物形成的质子梯度转化为化学能储存在ATP中。由于ATP合成酶在生物体正常功能发挥中的重要作用，ATP合成酶异常往往与疾病密切相关，比如神经退行性疾病、肿瘤等。ATP合成酶许多位点的突变会导致不同的癌症或其他疾病。此外，鉴于肿瘤细胞增殖对于氧化磷酸化通路能量供给的需求，越来越多的靶向ATP合成酶的新型抗肿瘤药物被开发出来，并表现出了良好的抗肿瘤活性。
[0003]近年来，哺乳动物ATP合成酶的结构和功能研究有了重大进展，但是至今无人纯化出纯度高、有活性的人源ATP合成酶并解析结构，当前用于研究线粒体蛋白主流的密度梯度离心的方法对设备要求较高，超速离心机价格昂贵，通常需要离心24h，离心时间长，并且纯度不高，使我们对人源ATP合成酶的结构功能机制的了解仍有限，由此制约了针对该靶点的新药开发。研究本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源ATP合成酶的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：制备人源线粒体粗提物，溶膜，得线粒体总蛋白溶液；利用阳离子交换柱对所述线粒体总蛋白溶液进行第一洗脱，收集洗脱液，得第一纯化液；利用阴离子交换柱对所述第一纯化液进行第二洗脱，收集洗脱液，得第二纯化液；利用凝胶排阻色谱柱对所述第二纯化液进行第三洗脱，得纯化的人源ATP合成酶。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述溶膜的时间为30min～120min。3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述溶膜的方式包括加入去污剂；所述去污剂包括LMNG、Digitonin和GDN中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的纯化方法，利用缓冲液C和缓冲液D进行所述第一洗脱；所述缓冲液C包括20mM 2
‑
(N
‑
吗啡啉)乙磺酸和0.004％W/V去污剂；所述缓冲液C的pH为6.0；所述缓冲液D包括20mM 2
‑
(N
‑
吗啡啉)乙磺酸、1M NaCl和0.004％W/V去污剂；所述缓冲液D的pH为6.0。5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，所述第一洗脱的流速为1mL/min；所述第一洗脱的方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序为：0min：所述缓冲液C的体积百分含量为95％；...

【专利技术属性】
技术研发人员：贡红日，饶子和，赖越峥，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：