具有减少的宿主细胞蛋白和提高的聚山梨醇酯-80稳定性的包含抗CTLA4单克隆抗体的方法和组合物技术

本文提供了在色谱方法中从生产蛋白分离宿主细胞脂肪酶的方法以及通过使用色谱方法从生产蛋白分离宿主细胞脂肪酶来改善生产蛋白制剂中的聚山梨醇酯

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有减少的宿主细胞蛋白和提高的聚山梨醇酯
‑
80稳定性的包含抗CTLA4单克隆抗体的方法和组合物
I.

[0001]本文提供了在色谱方法中从生产蛋白(例如，单克隆抗体)分离宿主细胞蛋白(HCP)(例如，脂肪酶)的方法。本文还提供了通过使用色谱方法从生产蛋白(例如，单克隆抗体)分离HCP(例如，脂肪酶)来改善生产蛋白制剂(例如，药物物质制剂或药品制剂)中的聚山梨醇酯
‑
80(PS
‑
80)稳定性的方法。本文还提供了包含结合细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)的抗体或其抗原结合片段的组合物。在另一个方面中，此类组合物还包含降低的宿主细胞蛋白水平并具有提高的PS
‑
80稳定性水平。
II.
技术介绍

[0002]在生产蛋白(例如，单克隆抗体)的生物加工和制造中，HCP(例如，脂肪酶)构成通常难以从生产蛋白除去的杂质的一部分。此类杂质可在生物药剂的安全性和功效方面引起各种问题。全世界的监管机构要求生物制药产品满足某些验收标准，包括杂质水平以及用于检测和定量杂质的测试。因此，期望开发高效且有效的从生产蛋白(例如，单克隆抗体)除去HCP(例如，脂肪酶)的方法。
[0003]CTLA4 mAb或CTLA4配体可以阻止CTLA4与其天然配体结合，从而阻断CTLA4对T细胞负调节信号的转导并增强T细胞对各种抗原的响应性。在这个方面中，来自体内和体外研究的结果基本上一致。在FDA批准用于人类使用的伊匹单抗(作为用于黑素瘤的单一疗法，或作为具有微卫星不稳定性的黑素瘤、肾癌、结肠直肠癌中与抗PD
‑
1抗体纳武单抗的组合疗法的一部分)后，验证了CTLA
‑
4为免疫治疗靶标。(Zhang，P.等，Mechanism and Immune Landscape Based ranking of Therapeutic Responsiveness of 22Major Human Cancers to Next Generation Anti
‑
CTLA
‑
4Antibodies，Cancers，12(2)，284)。有一些CTLA4 mAb正在临床试验中测试用于治疗前列腺癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胃肠道癌、肝癌、恶性黑素瘤等。(Grosso等，CTLA
‑
4blockade in tumor models:an overview of preclinical and translational research.Cancer Immun.13:5(2013))。
III.
技术实现思路

[0004]本公开提供了在色谱方法中从生产蛋白(例如，单克隆抗体)分离HCP(例如，脂肪酶)的方法，以及通过使用色谱方法从生产蛋白(例如，单克隆抗体)分离HCP(例如，脂肪酶)来改善生产蛋白制剂(例如，药物物质制剂或药品制剂)中的PS
‑
80稳定性的方法。本公开至少部分基于以下发现：在其中两种蛋白质之间的分离因子(α)和/或HCP(例如，脂肪酶)的分配系数(K
P
)达到一定数值范围的操作条件下，HCP(例如，脂肪酶)和生产蛋白(例如，单克隆抗体)可以充分分离。
[0005]在一个方面中，生产蛋白是抗
‑
CTLA4抗体。
[0006]在一个方面中，本文提供了一种通过色谱方法将宿主细胞脂肪酶与抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段分离的方法，包括：
[0007](a)在加样操作条件下使包含脂肪酶和抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段的加样流体通过色谱树脂；和
[0008](b)收集流过物中的抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段；
[0009]其中分离因子(α)是脂肪酶的分配系数(K
P
)与抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段的K
P
的比率，并且其中在加样操作条件下logα大于0.5。
[0010]在某些实施方式中，在加样操作条件下，logα大于1.0。
[0011]在一些实施方式中，脂肪酶的log K
P
在加样操作条件下大于1.0。在其他实施方式中，脂肪酶的log K
P
在加样操作条件下大于1.5。
[0012]在某些实施方式中，在加样操作条件下，logα大于0.5并且脂肪酶的log K
P
大于1.0。在一些实施方式中，在加样操作条件下，logα大于0.5并且脂肪酶的log K
P
大于1.5。在其他实施方式中，在加样操作条件下，logα大于1.0，并且脂肪酶的log K
P
大于1.0。再在其他实施方式中，在加样操作条件下，logα大于1.0，并且脂肪酶的log K
P
大于1.5。
[0013]在另一个方面中，本文提供了一种通过色谱方法将宿主细胞脂肪酶与抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段分离的方法，包括：
[0014](a)使包含脂肪酶和抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段的加样流体通过色谱树脂；和
[0015](b)在洗脱操作条件下用洗脱溶液从色谱树脂洗脱抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段；
[0016]其中α是脂肪酶的K
P
与抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段的K
P
的比率，并且其中在洗脱操作条件下logα大于0.5。
[0017]在某些实施方式中，在洗脱操作条件下，logα大于1.0。
[0018]在一些实施方式中，脂肪酶的log K
P
在洗脱操作条件下大于1.0。在其他实施方式中，脂肪酶的log K
P
在洗脱操作条件下大于1.5。
[0019]在某些实施方式中，在洗脱操作条件下，logα大于0.5并且脂肪酶的log K
P
大于1.0。在一些实施方式中，在洗脱操作条件下，logα大于0.5并且脂肪酶的log K
P
大于1.5。在其他实施方式中，在洗脱操作条件下，logα大于1.0，并且脂肪酶的log K
P
大于1.0。再在其他实施方式中，在洗脱操作条件下，logα大于1.0并且脂肪酶的log K
P
大于1.5。
[0020]在本文提供的各种方法的一些实施方式中，脂肪酶是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞脂肪酶。
[0021]在某些实施方式中，脂肪酶选自磷脂酶B
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样2(PLBL2)、脂蛋白脂酶(LPL)、溶酶体磷脂酶A2(LPLA2)、磷脂酶A2 VII(LP
‑
PLA2)和溶酶体酸性脂肪酶A(LAL)。在一个实施方式中，脂肪酶是PLBL2。在另一个实施方式中，脂肪酶是LP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含(i)约10mg/ml至约200mg/ml的抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段；(ii)约5mM至约20mM的缓冲剂；(iii)约6％至8％重量/体积(w/v)的非还原糖；(iv)约0.01％至约0.10％的非离子表面活性剂；和(v)约1mM至约20mM的抗氧化剂，和(vi)其中PLBL2、LPLA2和LPL的水平为≤1ng/ml CTLA4抗体。2.一种组合物，其包含(i)约10mg/ml至约200mg/ml的抗
‑
CTLA4抗体或其抗原结合片段；(vii)约5mM至约20mM的缓冲剂；(viii)约6％至8％重量/体积(w/v)非还原糖；(ix)约0.01％至约0.10％的非离子表面活性剂；和(x)约1mM至约20mM的抗氧化剂；(xi)残留量的宿主细胞脂肪酶，其中所述残留量的宿主细胞脂肪酶小于2ppm。3.一种组合物，其包含抗
‑
CTLA4单克隆抗体或其抗原结合片段、残留量的宿主细胞脂肪酶和聚山梨醇酯
‑
80，其中所述组合物包含稳定的聚山梨醇酯
‑
80浓度，其中所述稳定的PS80浓度保持处于或低于10％PS
‑
80降解。4.权利要求3的组合物，其中所述脂肪酶选自磷脂酶B样2(PLBL2)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、溶酶体磷脂酶A2(LPLA2)、磷脂酶A2 VII(LP
‑
PLA2)和溶酶体酸性脂肪酶A(LAL)。5.权利要求4的组合物，其中PLBL2、LPLA2和LPL的水平≤1ng/mg。6.权利要求3
‑
5任一项的组合物，其中所述组合物包含小于1ng PLBL2/mg CTLA4抗体。7.权利要求3
‑
6任一项的组合物，其中所述组合物包含小于1ng LPLA2/mg CTLA4抗体。8.权利要求3
‑
7任一项的组合物，其中所述组合物包含小于1ng LPL/mg CTLA4抗体。9.权利要求3
‑
8任一项的组合物，其中所述组合物包含小于1ng LP
‑
PLA2/mg CTLA4抗体。10.权利要求3
‑
9任一项的组合物，其中所述组合物包含小于1ng LAL/mg CTLA4抗体。11.权利要求3
‑
10任一项的组合物，其中使用各种方法通过完整PS
‑
80分子的量来测量所述PS
‑
80降解，所述方法包括质谱(MS)、液相色谱
‑
质谱(LCMS)或在具有带电气溶胶检测器(CAD)的HPLC系统上的固相萃取(SPE)。12.权利要求3
‑
11任一项的组合物，其中使用各种方法通过降解产物的量来测量所述PS
‑
80降解，所述方法包括质谱(MS)、液相色谱
‑
质谱(LCMS)或在具有带电气溶胶检测器(CAD)的HPLC系统上的固相萃取(SPE)。13.权利要求3
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12任一项的组合物，其中所述组合物包含(i)约10mg/ml至约200mg/ml的抗
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CTLA4抗体或其抗原结合片段。14.权利要求3
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13任一项的组合物，其中所述组合物包含25mg/ml的抗
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CTLA4抗体或其抗原结合片段。15.权利要求3
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14任一项的组合物，其中所述组合物包含50mg/ml的抗
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CTLA4抗体或其抗原结合片段。16.权利要求3
‑
12任一项的组合物，其中所述组合物包含(i)约10mg/ml至约200mg/ml
的抗
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CTLA4抗体或其抗原结合片段；(ii)约5mM至约20mM的缓冲剂；(iii)约6％至8％重量/体积(w/v)的非还原糖；(iv)约0.01％至约0.10％的PS
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80；和(v)约1mM至约20mM的抗氧化剂。17.权利要求3
‑
16任一项的组合物，其中与时间零结果相比，所述PS
‑
80浓度保持
±
0.02mg/mL。18.权利要求3
‑
16任一项的组合物，其中所述PS
‑
80降解在25℃下保持在或低于10％至少六个月。19.权利要求16的组合物，其中所述缓冲剂是L
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组氨酸缓冲剂或乙酸钠缓冲剂。20.权利要求16的组合物，其中所述非还原糖是蔗糖。21.权利要求16的组合物，其中所述抗氧化剂是甲硫氨酸，或其药学上可接受的盐。22.权利要求1
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21任一项的组合物，其中所述抗
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CTLA4抗体包含：i.包含如SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列的轻链CDR和包含如SEQ ID NO:11、12和13所示的氨基酸序列的重链CDR；ii.包含如SEQ ID NO:14、15和17所示的氨基酸序列的轻链CDR和包含如SEQ ID NO:11、12和13所示的氨基酸序列的重链CDR；或iii.包含如SEQ ID NO:14、15和18所示的氨基酸序列的轻链CDR和包含如SEQ ID NO:11、12和13所示的氨基酸序列的重链CDR。23.权利要求22的组合物，其中所述抗
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CTLA4抗体包含重链可变区a.包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的重链可变区和包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的轻链可变区；b.包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的重链可变区和包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的轻链可变区；c.包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的重链可变区和包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的轻链可变区；d.包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的重链可变区和包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的轻链可变区；e.包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列的重链可变区和包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列的轻链可变区；f.包含如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列的重链可变区和包含如SEQ ID NO:2...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：