一种快速检测斑马鱼线粒体琥珀酸脱氢酶活力的方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种快速检测斑马鱼线粒体琥珀酸脱氢酶活力的方法及应用。琥珀酸脱氢酶位于真核生物的细胞线粒体上，是氧化磷酸化的重要复合物，其活力高低一定程度上可反映线粒体活力状态。本方法中SDH活力检测基于使用氯化硝基四氮唑蓝作为电子受体，接受电子后产生不溶性蓝色物质，根据颜色的深浅反映SDH活力的高低。近些年来，由于斑马鱼发育迅速、产卵量大、饲养简单、胚胎透明等优势，已经成为线粒体相关疾病研究最受欢迎的模式动物之一。本发明专利技术相比现有技术，实现了快速、简单、高效地对斑马鱼幼鱼整体进行线粒体SDH活力分析，能够十分方便观察遗传或环境因素造成特异性组织线粒体活力改变，且对设备及环境要求低，有利于推广和应用。广和应用。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测斑马鱼线粒体琥珀酸脱氢酶活力的方法及应用


[0001]本专利技术属于生命科学与生物
，涉及一种快速检测斑马鱼线粒体琥珀酸脱氢酶活力的方法及应用。

技术介绍

[0002]线粒体病是由遗传缺陷引起线粒体氧化磷酸化系统异常，致使ATP合成障碍、能量不足导致广泛临床表现的一类可遗传疾病。线粒体拥有自已独立的的环形基因组(mtDNA),含37个编码基因，能够编码22种转运RNA(tRNA)，2种核糖体RNA(rRNA)以及13种蛋白，这些蛋白都是电子传递链上复合物的亚基。但是目前蛋白质组学研究已经鉴定和预测超过了1000种与哺乳动物线粒体相关的蛋白质，并且这些蛋白质大多是由核基因编码的。因此，线粒体DNA或是编码线粒体蛋白的核基因突变都有可能造成线粒体损伤，引起线粒体疾病。近些年，斑马鱼(Danio rerio)由于发育快，产卵量大；饲养简单，维护成本低；体外受精，胚胎透明；与人线粒体序列高度相似等优势，成为人类线粒体疾病研究的理想动物模型。
[0003]琥珀酸脱氢酶位于真核生物的细胞线粒体上，是线粒体标志酶之一，常作为细胞内氧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测斑马鱼线粒体琥珀酸脱氢酶活力的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)制作简易筛网；(2)配置SDH染色试剂；(3)斑马鱼幼鱼的饲养和收集；(4)SDH染色前幼鱼的预处理；(5)添加SDH染色试剂；(6)SDH染色后处理；(7)使用体式显微镜对SDH染色的幼鱼进行拍照，比较幼鱼各器官紫蓝色深浅的变化；(8)如需要观察幼鱼组织显微结构SDH活力，利用冰冻切片法进一步分析。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)简易筛网的制作通过以下步骤实现：(1)准备如下工具：50ml离心管、手术刀、100目尼龙网滤布、酒精灯、剪刀；(2)将50ml离心管去掉盖子，将管口较粗的部分放酒精灯上均匀燃烧1
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2mm，快速倒扣在尼龙网滤布上，用剪刀沿着管口裁剪滤布；(3)用酒精灯烧红手术刀，在离心管口10cm左右的位置快速进行切割，即完成简易筛网的制作。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)SDH试剂配置方法为：取5mM磷酸盐缓冲液，5mM乙二胺四乙酸，1mM氰化钾，0.2mM吩嗪硫酸甲酯，50mM琥珀酸，1.5mM氯化硝基四氮唑蓝，调pH为7.6，并用滤纸过滤。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)的幼鱼收集拥有遗传操作品系产的4
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20天斑马鱼幼鱼，或收集药物环境因素处理后4
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20天的野生型斑马鱼幼鱼，幼鱼前5天的鱼不需要喂养，5天后的幼鱼需要喂食草履虫。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)SDH染色前预处理具体步骤如下：(1)将幼鱼放入带有筛网的六孔板中，后续操作幼鱼皆在筛网中进行，用0....

【专利技术属性】
技术研发人员：管敏鑫，张青海，冀延春，何晓，姚世豪，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：