一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法技术

本发明专利技术公开了一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，包括以下步骤：收集越冬池中中国对虾亲虾粪便进行WSSV检测，淘汰检测结果为阳性的越冬池中的亲虾；对选留的亲虾进行单个检测，淘汰检测结果为阳性的个体；选留亲虾产卵孵化后对育苗池的仔虾进行抽样混合检测，淘汰阳性仔虾；将检测结果为阴性的仔虾个体放于室外养殖池的围格中进行养殖；收获时对每个围格养殖个体进行抽样混合检测，选留检测结果为阴性的围格内交尾雌虾进行越冬，作为第二年苗种繁育的亲虾。采用上述净化方案对中国对虾核心育种群进行连续多代的净化，可显著降低WSSV传播的风险，提高中国对虾的养殖成功率和产品质量安全。产品质量安全。产品质量安全。

【技术实现步骤摘要】
一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法


[0001]本专利技术属于中国对虾育种
，具体涉及一种中国对虾核心育种群 WSSV的净化方法。

技术介绍

[0002]中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)又称东方对虾、中国明对虾，是我国近海地方性特有种。中国对虾肉质鲜嫩味美，营养价值高，一直是我国江苏、山东、河北和辽宁等沿海地区的重要养殖物种，在养殖发展盛期(1990年前后)养殖产量达20万吨左右，占我国对虾养殖产量的70％。1993年由于大规模白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的爆发，中国对虾的养殖产量急剧下降，年产量长期徘徊在5万吨左右，经济损失惨重。
[0003]WSSV具有宿主范围广泛、感染能力强和致死率高等特点，中国对虾感染 WSSV后，3
‑
10天死亡率可达100％，其传播方式既可以在养殖水体中进行水平传播也可以有亲代向子代垂直传播。为了降低WSSV对水产养殖业造成的损失，科研工作者对WSSV的基因组、与宿主互作的机制、检测方法的改进及防治等方面开展了大量的研究，但目前还没有有效预防疫苗和治疗药物。因此，对中国对虾核心育种群采取净化措施，加强亲虾和苗种的检测，从源头上减少虾苗带毒的概率，对于保障我国中国对虾种质资源质量，防止WSSV传播和流行具有重要意义。
[0004]水产种业是水产养殖业的基础和源头，如果对核心育种群的种苗携带病原势必会使整个养殖业面临严重的疫病风险。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，该方法在中国对虾良种选育的基础上，重点针对对中国对虾养殖业危害最严重的白斑综合征病毒(WSSV)，通过对亲虾、苗种以及养殖过程中WSSV的全面监测和持续净化，综合降低中国对虾核心育种群中WSSV传播的风险，推动中国对虾疾病防控从有效控制到逐步净化消灭的转变，提高中国对虾的养殖成功率和产品质量安全。
[0006]本专利技术提供了一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，包括以下操作步骤：
[0007](1)收集越冬池中国对虾已交尾雌虾(亲虾)粪便，套式PCR检测法对亲虾粪便进行WSSV检测，淘汰检测结果为阳性的越冬池中的亲虾；每个越冬池的亲虾数量控制在200尾左右，分别在早、中、晚三个时间点收集亲虾粪便3 份分别放入灭菌的1.5mL的离心管中，连续收集3天。每尾亲虾的价格很高，每个越冬池控制数量在200尾，如果检测粪便为阳性，则将该越冬池的亲虾淘汰，不至于造成太大的经济损失；另外通过连续3天采集粪便进行取样，几乎能保证大部分亲虾都能取样到，而且不会造成检测负担。
[0008](2)对选留的亲虾进行单个检测，淘汰检测结果为阳性的个体；这一步骤保证了每一尾选留的亲虾都不携带WSSV，同时由于核心育种群数量控制在 1000尾左右，因此即使每
尾亲虾都检测也不会有太大的工作量；如果没有步骤 (1)的筛选，此步骤的检测工作量会很大，在实际生产中，越冬亲虾的阳性率高达50％以上，因此如果想要筛选出1000尾不携带WSSV的亲本，则至少检测2000尾以上的亲虾。
[0009](3)选留的亲虾进行产卵和孵化，待幼体发育至放苗规格时(体长约1.0cm) 对每个育苗池的仔虾进行抽样混合检测，淘汰阳性仔虾；
[0010](4)将检测结果为阴性的仔虾个体放于室外养殖池进行养殖；选留的仔虾个体采取围格方式进行养殖，每个围格的养殖数量控制在1000
‑
1200尾；分围格养殖能够防止大批量的感染，一旦发现一个围格发生阳性，则将该围格养殖的个体淘汰不会造成大面积传播；
[0011](5)收获时对每个围格养殖个体进行抽样混合检测，选留检测结果为阴性的围格内交尾雌虾进行越冬，作为第二年苗种繁育的亲虾；
[0012](6)重复上述步骤(1)
‑
(5)，连续净化5代以上。
[0013]其进一步的技术方案是：
[0014]步骤(2)中采用眼柄标记的方法对亲虾进行编号，取样组织为中国对虾的第二对步足。
[0015]步骤(3)中每个育苗池混合抽测样品为3个，每个样品的仔虾数量30
‑
50 尾，取样组织为全虾，连续抽测3天。
[0016]步骤(5)中每个围格混合抽测的样品为3个，每个样品的对虾数量为10 尾，取样组织为肝胰腺。
[0017]本专利技术与现有技术相比的有益效果：
[0018]在WSSV泛滥的情况下，中国对虾养殖的感染率在40％左右，有些个体感染并发病，有些个体则携带病毒但不发病，这些潜在的传染源即能够通过水平传播将WSSV传染同代个体，也能够通过环境、精子或卵子垂直传播感染下一代；如何能够切断传染源，建立无毒的核心繁育亲本是获得健康子代基础，本专利技术方法通过一个闭环的流程管理方法，从亲本开始严格选择，每一步都降低了携带WSSV风险。从源头上控制住WSSV水平传播和垂直传播的风险，从而能够获得不携带病毒的健康仔虾，降低了养殖过程中发病的风险。
附图说明
[0019]图1是本专利技术所述的中国对虾核心育种群WSSV净化技术流程图。
具体实施方式
[0020]为使本专利技术的特征及优点能够更加明显易懂，下面对本专利技术的具体实施方式做详细说明。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。具体流程图如图1所示。
[0021]实施例1：中国对虾核心育种群亲虾越冬池粪便WSSV检测和淘汰
[0022]2017年1月，共对24个中国对虾亲虾越冬池的粪便进行收集，每个越冬池的亲虾数量为200尾左右，分别在早中晚三个时间点进行收集，连续收集3天，收集的样品分别放入灭菌的1.5mL的离心管中，
‑
20℃保存备用，每个样品约 1～5g。对收集的216份样品进行WSSV检测，检测方法按照中国水产科学研究院黄海水产研究所起草的国家标准“白斑综合征
(WSD)诊断规程第2部分：套式PCR检测法(GB/T 28630.2
‑
2012)”执行。根据亲虾粪便中WSSV检测结果，淘汰样品检测结果为阳性的越冬池16个，阳性检出率为66.7％。对选留的 1500尾亲虾单独隔离养殖，所用设备包括室内越冬池壁、气石、软管和过滤筛绢等进行彻底消毒，专人管理。
[0023]实施例2：选留亲虾个体WSSV检测和淘汰
[0024]待选留亲虾由越冬池转移至产卵池前，对选留的每尾亲虾均进行WSSV检测，检测亲虾采用标有数字编号的眼标进行区分，取样组织为中国对虾的第二对步足，放入灭菌的1.5mL离心管中，
‑
20℃保存备用。共对1360尾亲虾进行 WSSV检测，淘汰阳性亲虾243尾，阳性检出率为17.9％。将选留的亲虾移入消毒好的产卵池，进行产卵和孵化。
[0025]实施例3：中国对虾仔虾WSSV检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，其特征在于所述方法包括以下操作步骤：(1)收集越冬池中国对虾已交尾雌虾粪便，套式PCR检测法对亲虾粪便进行WSSV检测，淘汰检测结果为阳性的越冬池中的亲虾；每个越冬池的亲虾数量控制在180
‑
200尾，分别在早、中、晚三个时间点收集亲虾粪便，连续收集3天；(2)对选留的亲虾进行单个检测，淘汰检测结果为阳性的个体；(3)选留的亲虾进行产卵和孵化，待幼体发育至放苗规格时对每个育苗池的仔虾进行抽样混合检测，淘汰阳性仔虾；(4)将检测结果为阴性的仔虾个体放于室外养殖池进行养殖；选留的仔虾个体采取围格方式进行养殖，每个围格的养殖数量控制在1000
‑
1200尾；(5)收获时对每个围格养殖个体进行抽样混...

【专利技术属性】
技术研发人员：何玉英，王琼，常志强，王佳佳，李健，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：