石榴农杆菌遗传转化的方法技术

本发明专利技术公开了石榴农杆菌遗传转化的方法，方法步骤如下：S1：选择组培继代石榴植株的嫩叶/茎尖/幼嫩茎段接种至预培养培养基；S2：将携带目的基因农杆菌接种至培养基中，摇菌至OD

【技术实现步骤摘要】
石榴农杆菌遗传转化的方法


[0001]本专利技术涉及遗传转化
，尤其涉及石榴农杆菌遗传转化的方法。

技术介绍

[0002]农杆菌介导的遗传转化是最为经济也是最为普遍的遗传转化途径之一。其操作相对简单，安全性较高。但是石榴的遗传转化目前为止研究的较为有限，较多见于石榴种子的下胚轴，但是由于石榴许多品种为杂合体，种子繁殖后代会出现性状分离等特征，导致遗传背景不清晰，不能够进行育种与相关基因功能的研究。
[0003]此外，由于木本植物的酚类物质较多，因此，在组织培养、共培养等遗传转化过程中会出现较为明显的褐化现象，导致转化率下降，甚至出现完全失败的情况，因此如何解决石榴遗传转化过程中褐化的问题，也是本领域亟需攻克的难题。

技术实现思路

[0004]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了石榴农杆菌遗传转化的方法，解决了石榴在遗传转化过程中褐化的问题，显著提高了不定芽出芽率和遗传转化成功率。
[0005]本专利技术提出的石榴农杆菌遗传转化的方法，方法步骤如下：
[0006]S1：预培养
[000本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.石榴农杆菌遗传转化的方法，其特征在于，方法步骤如下：S1：预培养选择组培继代石榴植株的嫩叶/茎尖/幼嫩茎段接种至预培养培养基；S2：农杆菌侵染液的制备将携带目的基因农杆菌接种至LB培养基100mL+卡那霉素50mg/L+利福平25mg/L中，摇菌至OD
600
＝0.6
‑
0.8，对收集的菌体进行清洗，并通过侵染培养基重悬菌体，制得农杆菌侵染液；S3：农杆菌侵染将S1中预培养后的嫩叶/茎尖/幼嫩茎段置于农杆菌侵染液中侵染；S4：共培养将S3中侵染后的嫩叶/茎尖/幼嫩茎段晾干并接种至共培养培养基进行培养；S5：选择培养对S4中共培养后的嫩叶/茎尖/幼嫩茎段进行清洗、晾干，然后接种至选择培养基进行培养；S6：继代培养将S5中选择培养基上已分化的不定芽取出，接种至继代培养几种进行培养；S7：炼苗及移栽。2.根据权利要求1所述的石榴农杆菌遗传转化的方法，其特征在于，所述S1中组培继代石榴植株的制备方法如下：将石榴枝条进行茎尖脱毒接种至WPM+IBA0.5
‑
0.7mg/L+琼脂6g/L+蔗糖20
‑
30g/L+活性炭0.6
‑
1.2g/L培养基中，每30
‑
40d继代一次。3.根据权利要求1所述的石榴农杆菌遗传转化的方法，其特征在于，所述组培继代石榴植株为第二代继代植株。4.根据权利要求1所述的石榴农杆菌遗传转化的方法，其特征在于，所述S1中预培养基为WPM+IBA 0.6mg/L+6
‑
BA 0.22mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱晶晶，王宁，
申请(专利权)人：安徽科技学院，
类型：发明
国别省市：