包含调节性T细胞的组合物及其制备和使用方法技术

本文提供离体扩增的脐带血来源的调节性T细胞群。还提供了生产和使用它们的方法。细胞群。还提供了生产和使用它们的方法。细胞群。还提供了生产和使用它们的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含调节性T细胞的组合物及其制备和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年8月11日提交的美国临时专利申请第63/064,129号、2020年6月12日提交的美国临时专利申请第63/038,345号、2020年3月17日提交的美国临时专利申请第62/990,913号以及2019年9月26日提交的美国临时专利申请第62/906,283号的权益，在此通过引用将其每一个的公开内容并入本文。


[0003]本公开总体上涉及免疫调节性T细胞(Treg)的领域。更具体地，本公开提供富集的脐带血来源的Treg群及其制备和使用方法。

技术介绍

[0004]Treg天然抑制和调节免疫反应。许多自身免疫性疾病、炎性病症和恶性肿瘤直接由Treg缺损/缺陷和/或抑制功能或内源性Treg的总细胞数的耗竭引起或加剧，这让自身反应性细胞毒性T细胞不受限制地增殖，从而导致细胞和组织损伤，其又转化为若干疾病表现。用异基因健康脐带血来源的Treg替换和补充此类有缺陷的Treg可以通过抑制自身反应性细胞毒性T细胞的有害作用而引起稳态的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种人Treg细胞群，其包含至少约1
×
108个人Treg细胞，所述人Treg细胞为：(i)≥60％CD4
+
CD25
+
；和(ii)≤10％CD4
‑
CD8
+
；其中所述人Treg细胞具有免疫抑制性。2.一种人Treg细胞群，其包含至少约1
×
108个人Treg细胞，所述人Treg细胞为：(i)≥60％CD4
+
CD25
+
；(ii)≥60％CD4
+
CD25
+
CXCR4
+
；和(iii)≤10％CD4
‑
CD8
+
；其中所述人Treg细胞具有免疫抑制性。3.一种人Treg细胞群，其包含至少约1
×
108个人Treg细胞，所述人Treg细胞为：(i)≥60％CD4
+
CD25
+
；(ii)≥60％CD4
+
CD25
+
α4β7
+
；和(iii)≤10％CD4
‑
CD8
+
；其中所述人Treg细胞具有免疫抑制性。4.一种人Treg细胞群，其包含至少约1
×
108个人Treg细胞，所述人Treg细胞为：(i)≥60％CD4
+
CD25
+
；(ii)≥60％CD4
+
CD25
+
CD11a
+
；和(iii)≤10％CD4
‑
CD8
+
；其中所述人Treg细胞具有免疫抑制性。5.根据权利要求1至4中任一项所述的群，其包含至少约1
×
109个人Treg细胞。6.根据权利要求1至5中任一项所述的群，其中所述人Treg细胞通过使用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯细胞内染色染料或CellTrace
TM Violet细胞内染色染料的测定确定具有免疫抑制性。7.一种用于从至少一个冻存的人脐带血单位产生扩增的活化人调节性T(Treg)细胞群的方法，所述方法包含：a)解冻所述冻存的人脐带血单位；b)在功能封闭的系统中稀释和洗涤解冻的脐带血单位；c)基于CD25
+
细胞表面表达使用双重选择方法分离天然存在的Treg细胞；d)在气体可渗透性培养器皿内的培养基中，在存在有效量的白介素
‑
2(IL
‑
2)和与CD3和CD28特异性结合的试剂的情况下离体扩增所分离的CD25
+
Treg细胞多达10天、多达12天或多达14天，其中所述培养基约每48小时更换一次，以产生活化CD25
+
Treg细胞群；和e)从所述培养基中收集活化CD25
+
细胞以产生扩增的活化人Treg细胞群。8.根据权利要求7所述的方法，其中使用单个脐带血单位。9.根据权利要求7所述的方法，其中使用2至4个汇集的脐带血单位。10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中与CD25特异性结合的试剂是抗CD25抗体或其抗原结合片段。11.根据权利要求7至10中任一项所述的方法，其中所述与CD25特异性结合的试剂缀合到固体载体。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述固体载体是磁微珠。
13.根据权利要求7至11中任一项所述的方法，其中所述与CD3和CD28特异性结合的试剂包含抗CD3抗体或其抗原结合片段和抗CD28抗体或其抗原结合片段。14.根据权利要求7至12中任一项所述的方法，其中所述与CD3和CD28特异性结合的试剂包含抗CD3包被珠和抗CD28包被珠。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗CD3包被珠和所述抗CD28包被珠的比为1:1。16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述CD25
+
细胞和所述抗CD3和抗CD28包被珠的比为1:1。17.根据权利要求7至16中任一项所述的方法，其中所述IL
‑
2的有效量多达约1000IU/ml。18.根据权利要求7至17中任一项所述的方法，其中所述IL
‑
2的有效量为约1000IU/ml。19.根据权利要求7至18中任一项所述的方法，其中在步骤d)刚开始时，将步骤c)中所分离的CD25
+
Treg细胞悬浮在包含IL
‑
2的培养基中。20.根据权利要求7至19中任一项所述的方法，其中在步骤e)中，培养约1
×
106个CD25
+
细胞/mL。21.根据权利要求7至20中任一项所述的方法，其中在步骤e)中，所述细胞最初在膜表面积为10cm2的气体可渗透性培养器皿中培养。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述培养物随后被转移到膜表面积为100cm2的气体可渗透性培养器皿中。23.根据权利要求7至22中任一项所述的方法，其中在步骤d)中，所述培养物不进行混合和重新悬浮。24.根据权利要求7至23中任一项所述的方法，其中在培养14天后收集约1
×
109至约2
×
109活化CD25
+
细胞。25.根据权利要求7至24中任一项所述的方法，其中在步骤a)中，所述冻存的人脐带血单位在水浴中一步解冻。26.根据权利要求7至25中任一项所述的方法，其中步骤b)不包含手动洗涤。27.根据权利要求7至26中任一项所述的方法，其中步骤b)在包含PBS、EDTA和约0.5％人血清白蛋白的溶液中进行。28.根据权利要求7至27中任一项所述的方法，其中在步骤c)中使用双铁磁柱法分离CD25
+
Treg细胞。29.一种用于从至少一个冻存的人脐带血单位产生扩增的活化人调节性T(Treg)细胞群的方法，所述方法包含：a)在水浴中一步解冻所述冻存的人脐带血单位；b)在功能封闭的系统中于包含PBS、EDTA和0.5％人血清白蛋白的溶液中稀释和洗涤解冻的脐带血单位，而无需手动洗涤；c)基于CD25
+
细胞表面表达使用双重选择方法及使用双铁磁柱法分离天然存在的Treg细胞；d)在气体可渗透性培养器皿内的培养基中，在存在约1000IU/ml白介素
‑
2(IL
‑
2)和抗CD3和抗CD28包被珠的情况下离体扩增所分离的CD25
+
Treg细胞多达10天、多达12天或多达
14天，其中所述培养基约每48小时更换一次，以产生活化CD25
+
Treg细胞群；其中所述CD25
+
Treg细胞和所述抗CD3和抗CD28包被珠的比为1:1；其中培养物不进行混合和重新悬浮；和e)从所述培养基中收集所述活化CD25
+
细胞以产生扩增的活化人Treg细胞群。30.根据权利要求7至29中任一项所述的方法，所述方法还包含冻存所述扩增的活化人Treg细胞群。31.一种通过根据权利要求7至30中任一项所述的方法产生的活化人Treg细胞群，其中所述Treg细胞为至少90％CXCR4
+
。32.根据权利要求1至6中任一项所述的群，其中所述Treg细胞为至少90％CXCR4
+
。33.根据权利要求1至6、31和32中任一项所述的群，其中所述Treg细胞为至少95％CXCR4
+
、至少95％CD45RA
+
和至少80％CD45RO
+
。34.根据权利要求1至6和31至33中任一项所述的群，其中所述Treg细胞进一步为至少95％CD95
+
、至少95％HLADR

【专利技术属性】
技术研发人员：S帕尔马，
申请(专利权)人：塞伦科斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：