一种多重荧光pcr检测EGFR基因突变的引物和探针组合物、试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种多重荧光PCR检测EGFR基因突变的引物和探针组合物、试剂盒和检测方法，所述引物和探针组合物包括EGFR基因突变检测特异性引物对、EGFR基因特异性探针、扩增阻断探针和内控系统，其序列如SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 44所示。本发明专利技术在3个反应管内可同时检测EGFR基因32种突变，检测灵敏度为1％，操作简单，节约成本，样本量要求低，临床应用范围广。本发明专利技术可检测新鲜组织样本，FFPE样本及胸腹水样本。样本。

【技术实现步骤摘要】
一种多重荧光pcr检测EGFR基因突变的引物和探针组合物、试剂盒和检测方法


[0001]本专利技术属于EGFR基因突变检测
，具体涉及一种多重荧光pcr检测EGFR基因突变的引物和探针组合物、试剂盒和检测方法。

技术介绍

[0002]肺癌是目前世界上第一大癌，肺癌的发生率和死亡率在所有肿瘤中都占首位。在肺癌患者中，非小细胞肺癌(NSCLC)约占80
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85％，目前靶向治疗已经成为非小细胞肺癌(NSCLC)临床治疗的重要手段。EGFR是一种跨膜受体络氨酸激酶，该区域的激活即磷酸化对癌细胞增殖、生长的相关信号传递具有重要意义，因此，EGFR作为NSCLC的分子靶标受到普遍关注，并陆续开发出了吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)和埃克替尼(icotinib)等EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor，TKI)，多项临床试验已证实，EGFR基因突变的晚期NSCLC患者能从EGFR
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TKIs显著获益。EGFR基因突变多位于外显子18
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多重荧光pcr检测EGFR基因突变的引物和探针组合物，其特征在于，所述组合物包括19del、S768I、L858R、EGFR 20ins、T790M、L861Q、G719X及内控的引物和探针，上述引物和探针分为组1、组2和组3，如下表所示：
。2.一种多重荧光pcr检测EGFR突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物和探针组合物。3.根据权利要求2所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含：NEB universal probe qPCR master mix、权利要求1所述的引物和探针组合物、阳性对照和阴性对照。4.根据权利要求3所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括质粒DNA和野生型DNA混合物；所述阴性对照包括无核酸酶水。5.权利要求1所述的引物和探针组合物，或权利要求2所述的试剂盒在基于多重荧光pcr检测EGFR突变中的应用。6.一种多重荧光pcr检测EGFR突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)准备样品；(2)构建多重荧光PCR扩增反应体系，包括分别由权利要求1所述的组1、组2和组3构成的三种反应体系，进行PCR反应；(3)根据荧光PCR扩增仪显示的
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ct值判定检测结果。7.根据权利要求6所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样品包括组织样本，FFPE样本或胸腹水样本。8.根据权利要求6所述的多重荧光pcr检测EGFR突变的方法，其特征在于，步骤(2)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：高如霞，孙克京，洪兵，邢红兵，
申请(专利权)人：江苏吉诺思美精准医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：