一种基于DNA纳米技术的蛋白质邻近标记方法及其应用技术

本发明专利技术属于邻近标记技术领域，具体涉及一种基于DNA纳米技术的蛋白质邻近标记方法及其应用。本发明专利技术利用DNA纳米技术将酶靶向到免疫突触部分，与当前邻近标记反应相比，操作简便，经济高效，且用时短，只需10分钟即可完成生物素化邻近标记，无需提前将邻近标记的酶与目的蛋白融合，也无需转染，从而极大限度地还原了蛋白与蛋白天然的作用，可用于研究蛋白与蛋白之间微弱或瞬时的相互作用，也可以用于质谱鉴定并进行蛋白质组学分析，挖掘与免疫突触相关的新蛋白分子，为药物的研发提供新思路。同时DNA纳米技术的运用可有效放大信号，大大提高了标记效率。且标记的特异性好，几乎无非特异性背景信号。性背景信号。性背景信号。

【技术实现步骤摘要】
一种基于DNA纳米技术的蛋白质邻近标记方法及其应用


[0001]本专利技术属于邻近标记
，具体涉及一种基于DNA纳米技术的蛋白质邻近标记方法及其应用。

技术介绍

[0002]邻近标记技术的策略通常为将邻近标记的酶与目的蛋白融合表达，然后通过转染融合构建体或替代诱导方法(例如病毒感染等)，将酶靶向到细胞特定部位，再添加生物素等小分子底物，则该邻近标记的酶可以催化与目的蛋白空间位置邻近的蛋白与生物素等小分子发生共价结合，使得目的蛋白以及邻近蛋白生物素化，随后用链霉亲和素偶联的磁珠富集被标记上生物素的蛋白，并通过质谱法对蛋白进行鉴定和生物信息学分析。目前，邻近标记技术已经被广泛用于研究活细胞和生物体中的蛋白质定位以及蛋白质
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蛋白质，蛋白质
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RNA和蛋白质
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DNA间的相互作用，并成功用于绘制许多生物体内的蛋白质组图谱，成为研究蛋白质组学的宝贵工具。
[0003]邻近标记技术所使用的工程化酶主要分为两大类：(1)过氧化物酶，如工程抗坏血酸过氧化物酶2(APEX2)，辣根过氧化物酶(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于DNA纳米技术的蛋白质邻近标记方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：S1、由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的DNA序列合成DNA纳米结构A，由SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5所示的DNA序列合成DNA纳米结构B；S2、将DNA纳米结构A和DNA纳米结构B分别与两个不同的细胞孵育，使其分别稳定锚定在两个细胞的细胞膜上，并分别形成分体式DNA酶；S3、将两个锚定了DNA的细胞共同孵育，在超抗原刺激下使两细胞间形成免疫突触，使得分别锚定在两个细胞的细胞膜上的分体式DNA酶形成结构完整有活性的酶，从而在免疫突触部位形成DNA酶，最后在免疫突触部分的蛋白上标记上生物素。2.根据权利要求1所述的一种基于DNA纳米技术的蛋白质邻近标记方法，其特征在于，DNA纳米结构A和DNA纳米结构B的合成程序均为95℃退火10分钟，再从95℃迅速降温到4℃，最后在4℃保持。3.根据权利要求1所述的一种基于DNA纳米技术...

【专利技术属性】
技术研发人员：张元庆，郑紫蔚，陈亮，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：