羧化酶突变体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及一种羧化酶突变体及其制备方法和应用。羧化酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:3是SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第492位氨基酸由Val突变为Pro得到。本发明专利技术的羧化酶突变体实现了以糠醛和甲醛为原料生产呋喃铵盐前体物质1

【技术实现步骤摘要】
羧化酶突变体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种羧化酶突变体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]头孢类抗生素是近年来临床应用中最为广泛的抗感染类药物。头孢呋辛具有抗菌广、耐β
‑
内酰胺酶、对肾脏毒副作用小等优点，是近年来发展势头很好的头孢类抗生素。头孢呋辛是一种非经胃肠给药的半合成广谱头孢素菌类抗生素，呋喃铵盐是临床上运用很广的抗生素头孢呋辛的中间体之一。
[0003]中国专利CN 112876436 A公开一种高选择性制备呋喃铵盐的方法，包括以下步骤：往氧化釜中加入水、酸性溶液和2
‑
乙酰呋喃，升温滴加氧化剂反应，得2
‑
氧代
‑2‑
呋喃乙酸；将2
‑
氧代
‑2‑
呋喃乙酸降温后加甲氧胺反应，得2
‑
甲氧胺
‑2‑
呋喃乙酸；向氨化成盐釜中加入甲醇，加2
‑
甲氧胺
‑2‑
呋喃乙酸，通入氨气反应，得呋喃铵盐。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羧化酶突变体，其特征在于其氨基酸序列为SEQ ID NO:3。2.根据权利要求1所述的羧化酶突变体，其特征在于所述的SEQ ID NO:3是SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第492位氨基酸由Val突变为Pro得到。3.根据权利要求2所述的羧化酶突变体，其特征在于所述的SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的编码基因为SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的羧化酶突变体，其特征在于所述的SEQ ID NO:3的编码基因为SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。5.一种权利要求1
‑
4任一所述的羧化酶突变体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)合成SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的编码基因，得到SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；(2)将SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列进行定点突变，得到SEQ ID NO:3的编码基因；(3)将SEQ ID NO:3的编码基因进行基因克隆，得到含有羧化酶突变体编码基因的质粒；(4)将含有羧化酶突变体编码基因的质粒导入感受态细胞中，得到羧化酶突变体的表达菌株；(5)羧化酶突变体的表达菌株进行诱导发酵，得到羧化酶突变体。6.根据权利要求5所述的羧化酶突变体的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的定点突变的引物序列如下：上游引物V
‑
492
‑
P
‑
F：5
′‑
CCAAGGGCTATGGTCCGCAAGCGCTGAAAG
‑3′
，下游引物V
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：马钦元，崔希礼，朱晓刚，沈剑，王宾，付凯，
申请(专利权)人：山东金城医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：