一种人红细胞制备凋亡囊泡的方法与应用技术

本发明专利技术提供一种人红细胞制备凋亡囊泡的方法，通过采集人静脉血后分离红细胞并体外添加红细胞凋亡诱导药物诱导其快速凋亡，从而产生大量的凋亡囊泡，通过梯度离心法进行分离得到的凋亡囊泡。凋亡囊泡的制备方法简单，且时间短、产量高，并可以进行快速检测，通过本发明专利技术的方法制备的凋亡囊泡可促进人骨髓间充质干细胞成骨向分化，从而提高人骨髓间充质干细胞体外成骨能力，达到促进骨再生的目的，在应用于促进人骨髓间充质干细胞成骨向分化药物的制备和骨缺损治疗方面有着较广阔的开发前景。制备和骨缺损治疗方面有着较广阔的开发前景。制备和骨缺损治疗方面有着较广阔的开发前景。

【技术实现步骤摘要】
一种人红细胞制备凋亡囊泡的方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物组织工程
，具体为一种可用于促进间充质干细胞成骨分化的人红细胞制备凋亡囊泡的方法与应用。

技术介绍

[0002]外伤、感染、手术或先天畸形导致的骨缺损在临床中非常常见，通过骨组织工程进行骨再生治疗是组织工程研究领域的热点。近年来，外泌体等细胞外囊泡在骨再生中的应用逐渐得到重视。细胞外囊泡是细胞分泌的具有双层膜结构的囊泡状小体，直径从30nm到5000nm不等，根据粒径大小和分泌方式主要分为外泌体、微囊泡、凋亡囊泡。生理状态下的细胞主要分泌外泌体和微囊泡；而凋亡状态下的细胞主要分泌凋亡囊泡（apoptotic vesicles，apoVs），可以分为粒径50
‑
1000nm的凋亡微囊泡和粒径1000
‑
5000nm的凋亡小体以及粒径小于150nm的凋亡外泌体。细胞凋亡是机体新陈代谢必不可少的环节，而骨骼在损伤后修复过程中也存在着受损细胞凋亡等过程。现有技术在提取细胞凋亡囊泡时多采用星形孢菌素等细胞毒性药物与细胞共培养12
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人红细胞制备凋亡囊泡的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）静脉采集血液离心，提取下层红色沉淀，无菌PBS洗涤2次获得红细胞；2）分离得到的红细胞中加入红细胞凋亡诱导液，冰上诱导处理15
‑
30分钟，通过梯度离心法获取人红细胞来源的凋亡囊泡；所述红细胞凋亡诱导液由、和EDTA
‑
2Na 0.1mM组成。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，红细胞与红细胞凋亡诱导液体积比为1:6
ꢀ‑ꢀ
1:10。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导处理时间为30分钟。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述红细胞凋亡诱导液pH7.1
‑
7.4。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：周永胜，张晓，邵玉子，江雨荷，杨坤坤，
申请(专利权)人：北京大学口腔医学院，
类型：发明
国别省市：