Pparg基因定点突变小鼠模型的构建与应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，涉及两种Pparg基因定点突变小鼠模型的构建和应用。本发明专利技术运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，对Pparg基因的编码第166位苏氨酸的位置进行人工突变，并以此成功制作了两种定点突变小鼠品系。本发明专利技术亦基于获得的Pparg基因定点突变小鼠品系，通过多种细胞、生化、分子生物学的研究手段，分析了这两种品系的多种生理与病理状态、确定了其用于相关研究的应用价值。同时，Pparg基因定点突变小鼠可用于相关药物的筛选、药物设计、药理/毒理学、药效学、药物代谢动力学以及治疗靶标发掘的应用。靶标发掘的应用。

【技术实现步骤摘要】
Pparg基因定点突变小鼠模型的构建与应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及两种Pparg基因定点突变小鼠模型的构建和应用。

技术介绍

[0002]PPARγ是一种在细胞增殖、分化、代谢及功能表型维持等诸多生物学过程中具有重要地位的核受体转录因子。PPARγ存在于多种细胞类型中，如脂肪细胞、肝脏细胞、肌肉细胞等代谢器官来源细胞；巨噬细胞、T/B细胞、树突状细胞等免疫细胞；神经元等神经系统来源的细胞中。作为经典的临床药物靶点，PPARγ在受到完全激动剂噻唑烷二酮类(TZDs)药物激动的情况下，可非常显著的增强II型糖尿病患者的胰岛素敏感性，降低血糖。同时，这种激动作用可以降低代谢紊乱的器官及组织中的炎性细胞的浸润，增强免疫调控性细胞的活力，以此维持机体的代谢和免疫稳态。但PPARγ活力的完全激活也会带来诸多不利的副作用，这背后的本质因素是由于我们对PPARγ广泛的生物学行为以及其作用机制的研究存在大量的空白。同时，围绕该靶点的药物开发亦陷入停滞阶段。
[0003]转基因小鼠模型对对生命科学、基础医学的发展具有里程碑式的意义本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Pparg基因定点突变小鼠作为模型在研究生理与病理过程中的应用。2.Pparg基因定点突变小鼠模型在药物筛选、药物设计及开发中的应用。3.Pparg基因定点突变小鼠模型在药理/毒理学、药效学、药物代谢动力学以及诊断与治疗靶标发掘研究中的应用。4.Pparg基因定点突变小鼠模型用于开发制备检测试剂盒、试纸或芯片中的应用。5.构建Pparg基因定点突变小鼠模型所用的gRNA序列与Donor DNA序列及其用途。6.权利要求1
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4中所述的Pparg基因定点突变小鼠，其特征在于：Pparg基因编码第166位苏氨酸的位置被人为突变，产生了两个品系全身性的定点突变小鼠。这两个品系分别为PPARγ第166位苏氨酸突变为丙氨酸(TA突变)小鼠，及PPARγ第166位苏氨酸突变为天冬氨酸(TD突变)小鼠。7.根据权利要求1中的应用，亦根据PPARγ对内分泌系统、免疫系统及神经系统广泛的调控功能，因此应用于研究的生理过程包括：物质与能量代谢、代谢器官或组织的发育及运作、内分泌功能、细胞代谢功能与机理等代谢内分泌相关的生理功能；免疫细胞发育与活化、免疫器官的发育与运作、血细胞发育与功能、免疫应答及调控、及肿瘤免疫等免疫系统相关的生理功能；神经细胞发育及功能、神经系统调节机能、及神经信号传导等神经系统相关生理功能呢。8.根据权利要求1中的应用，病理过程包括与PPARγ功能紧密相连的疾病，具体疾病类型包括代谢性疾病：肥胖、糖尿病、脂肪组织代谢紊乱、脂肪细胞分化障碍、动脉粥样硬化、肿瘤、代谢性肾脏疾病、代谢性肝病、代谢性肌肉疾病等。亦包含PPARγ蛋白功能异常所导致的免疫系统疾病：代谢性炎症、急性与慢性炎症、免疫细胞或系统发育不良、自体免疫疾病、过敏及肿瘤免疫异常等。9.根据权利要求1中的应用，可用于研究的对象为任意一种从Pparg基因定点突变小鼠中获得的细胞或组织样本，包括：血清血浆、组织器官样本提取物、从组织或器官中分选的细胞与细胞体外培养物以及组织器官的样本切片等。10.根据权利要求2中的应用，其特征在于运用Pparg基因定点突变小鼠为模型，利用小鼠活体或其分离的细胞组织样本，用于调控权利要求6
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7中所述的生理及病理过程中任意一种的药物的筛选、设计、优化及相应制剂制备。药物的类型包括：调控PPARγ功能或活性的小分子化合物、短肽、抗体或酶；与PPARγ功能相关的蛋白、质粒载体；调控PPARγ功能或活性基因编辑工具及病毒；免疫细胞制剂、干细胞制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈萍萍，杨南飞，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：