评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险的方法技术

本发明专利技术提供一种评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险的方法，所述方法包括：(1)确定生物分子拟阈值还原水平L

【技术实现步骤摘要】
评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险的方法


[0001]本专利技术一般涉及生物制药领域；具体地，涉及生物分子生产过程中还原风险的评估。

技术介绍

[0002]生物分子(例如，抗体)的还原现象常发生在细胞培养纯化的生产过程中，具体表现为在细胞培养液收获澄清后的放置期间，目标蛋白质(例如，抗体)的亚基间二硫键被还原为自由巯基，导致分子结构被破坏。
[0003]当前关于还原现象的机理研究已较为全面。还原的发生主要基于硫氧还蛋白(Trx)系统，或基于谷胱甘肽系统。在NADPH的存在下，蛋白质的二硫键在相关还原酶的作用下被还原为自由巯基。还原现象的产生主要归因于细胞破碎，致使有还原能力的细胞内容物释放到细胞培养液中。二硫键对于蛋白质分子折叠、构象和功能具有重要作用。二硫键的还原除了会影响蛋白质分子功能之外，还会产生蛋白质分子相关杂质，且可能影响产品稳定性。
[0004]在生物分子生产过程中，预防上述还原现象的发生至关重要。当前报道和采用的防还原措施主要有：通气(例如，空气或氧气)以提高溶氧，通气并降温、添加弱氧化剂(例如，硫酸铜)，或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种评估细胞培养介质上清液中生物分子还原风险的方法，所述方法包括：(1)确定生物分子拟阈值还原水平L
th
；(2)测定所述细胞培养介质上清液的还原水平L
d
；和(3)比较L
d
与L
th
以判断还原风险的存在，其中，若L
d
大于或等于L
th
，则表示有还原风险。2.如权利要求1所述的方法，其中，确定生物分子拟阈值还原水平L
th
包括：建立梯度稀释还原水平；和，确定使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平和未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平；其中，使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平或未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平被作为所述拟还原阈值水平L
th
。3.如权利要求2所述的方法，其中，建立梯度稀释还原水平可包括：收集细胞；裂解细胞；获得细胞裂解上清液；和，梯度稀释细胞裂解上清液，建立不同梯度稀释还原水平。4.如权利要求3所述的方法，其中，确定使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平和未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平包括：测试各梯度稀释细胞裂解上清液的还原水平；测试生物分子在各梯度稀释细胞裂解上清液中还原与否；和，确定使所述生物分子发生还原的最低梯度稀释还原水平和未使所述生物分子发生还原的最高梯度稀释还原水平。5.如权利要求1所述的方法，其中，还原水平由还原指示剂指示。6.如权利要求5所述的方法，其中，所述还原指示剂包括选自下组的那些：还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH、二氯酚靛酚DCPIP、活细胞破碎...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟如杰，崔以晴，李雨桐，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：