海洋腹足类DNA的提取方法及其简化基因组建库方法技术

本发明专利技术属于分子生物学检测技术领域，涉及一种海洋腹足类DNA的提取方法及其简化基因组建库方法，包括取组织样清洗剪碎，加入试剂后破碎，加入酶进行消化，然后离心、过凝胶柱，经过多次过凝胶柱及离心等处理过程提取到DNA；提取的DNA进行纯化，然后依次经过引物退火、酶切反应、连接接头、PCR1、琼脂糖凝胶检测、PCR2、琼脂糖凝胶检测、样本纯化和筛选、琼脂糖凝胶检测步骤建立基因组文库。该提取方法适用于海洋腹足类DNA提取，使提取的DNA质量提升，能够满足海洋腹足类简化基因组建库的要求；并通过改进简化基因组建库的步骤，解决了现有技术中存在的海洋腹足类简化基因组建库的产量及成功率问题。功率问题。

【技术实现步骤摘要】
海洋腹足类DNA的提取方法及其简化基因组建库方法


[0001]本专利技术属于分子生物学检测
，具体涉及一种海洋腹足类DNA的提取方法及其简化基因组建库方法。

技术介绍

[0002]海洋腹足类的肌肉组织(如腹足)是提取DNA的优良部位，但其被自身分泌的富含多酚蛋白和粘多糖的黏液所包裹。海洋腹足类的生物矿化、黏附结构以及富含多酚蛋白和粘多糖的黏液会阻碍DNA提取、纯化过程，导致总DNA提取过程中经常出现总量低或者质量低的问题，对于个体比较小的物种，这种情况更为严重，如果不去除这些物质，很难得到质量较好的DNA，从而难以构建简化基因组测序文库。
[0003]现有技术中，有采用高PVP和β
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巯基乙醇提取法针对含有大量多糖和多酚类次生代谢物质的植物的DNA提取，但是由于动物和植物高质量DNA的提取存在较大差异，对于动物的DNA提取是否适用尚不可知，尤其是海洋腹足类DNA的提取更为复杂。
[0004]现有简化基因组建库技术针对海洋腹足类来讲，建库的成功率较低，且因海洋腹足类的生物矿化、黏附结构以及富含多酚蛋白和粘多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海洋腹足类DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向离心管中加入CTAB溶液和β
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巯基乙醇，然后取组织样清洗，加入离心管中，剪碎，再向离心管中加入交联聚乙烯吡咯烷酮，破碎3～5次，每次粉碎时间25～35s；(2)将破碎好的离心管放入金属浴中，50～60℃下孵育7～13min，然后加入蛋白酶K和RNA酶，50～60℃下孵育3.8～4.2h，孵育期间每隔30min充分震荡一次离心管；(3)离心，室温冷却4～6min后，转移上清液于凝胶柱中，向凝胶柱中加入等体积预混V(苯酚):V(氯仿):V(异戊醇)＝25:24:1，颠倒混匀8～12min，然后在4℃下14000r离心8～12min；取上清液于离心管中，加入等体积的V(氯仿):V(异戊醇)＝24:1，颠倒混匀8～12min，然后在4℃下14000r离心8～12min；再次取上清液于新的离心管中，加入等体积的异丙醇，颠倒20～30次，室温孵育4～6min，在4℃下14000r离心25～35min；(4)弃上清液，加入75％冰乙醇混匀，4℃，14000r离心8～12min，弃上清液，加入70％冰乙醇混匀，4℃，14000r离心1.5～2.5min，再次弃上清液，开盖并放于通风处晾干17～23min，加入无RNase的水，放于4℃冰箱溶解过夜。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，称取的组织样在生理盐水中充分清洗后擦干，然后加入离心管中；步骤(1)中破碎次数为4次，破碎时间30s。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王杰，徐家伟，胡利莎，董云伟，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：