【技术实现步骤摘要】
一种转录组学标准品及其制备方法
[0001]本专利技术属于转录组学领域，具体涉及一种转录组学标准品及其制备方法。
技术介绍
[0002]近年来，随着生命组学研究包括基因组学、转录组学、翻译组学和蛋白质组学的快速发展以及生物信息与大数据科学交叉应用的推动下，孕育了一种新型医学概念和医疗模式，即精准医疗。
[0003]生命组学研究是揭示疾病机制和精准医疗最重要的手段之一，组学的数据质量直接关乎疾病机制的准确性和精准医疗的有效性。然而，目前的组学数据因各实验室选择的标准品没有统一，同时样品处理方式多样，测定平台多样化以及分析技术不精准，导致跨平台和跨实验室数据的重复性和实验性差。人类通用参考RNA标准品(Universal Human Reference RNA,UHRR)是包括HeLa在内的10种癌细胞系的混合RNA，其不稳定性是众所周知的。实际上，在UHRR批次间比较中，Pearson相关性仅达到R2＝0.9478，这表明即使在短生产周期内也存在这种不稳定性。这种变异预计在长生产周期内会成倍增加，不足以评估随着深度和分...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种转录组学标准品，其特征在于：所述标准品为从MHCC97H细胞株中提取获得的总mRNA。2.如权利要求1所述的转录组学标准品；其特征在于：所述的总mRNA由以下方法制备而成：步骤一、提取MHCC97H细胞的总RNA；步骤二、采用poly
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AmRNA富集试剂盒富集总RNA中的poly
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A mRNA获得总mRNA。3.一种试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包含有权利要求1或2任一项所述的转录组学标准品。4.一种如权利要求1或2任一项所述的转录组学标准品的制备方法；其特征在于包括以下步骤：步骤一、培养MHCC97H细胞；步骤二、提取总RNA；步骤三、提取总mRNA。5.如权利要求4所述的转录组学标准品的制备方法；其特征在于：步骤二的具体操作为：1、待细胞长满75cm2培养瓶，弃培养上清，置冰上，用预冷PBS洗两；尽弃PBS，加入预冷Trizol，充分震荡混匀；2、每1000微升Trizol加入0.2mL氯仿，剧烈混匀15s，室温放置3min，可观察到样品开始分层；3、12000g，4℃条件下离心15min，使样品分成三层；4、吸取上层水相，转移至新的1.5mL EP管中，注意操作时不要吸取到中间层液体；5、加入800μL异丙醇，倒置混匀；6、置于
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20℃静置8h；7、8h后，12000g，4离心30min，去除上清液；8、加入1mL 75％
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20℃的乙醇；9、7500，4℃离心5min，去除上清；10、重复步骤8、9一次；11、去除残留的乙醇，打开管盖，风干5min；12、视留存颗粒大小加入约30～60μLRNase Free纯水溶解，此步骤得到总RNA，置于
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80
°
冰箱保存。6.如权利要求4所述的转录组学标准品的制备方法；其特征在于：步骤三的具体操作为：采用VAHTS mRNA Caputre Beads试剂盒提取总mRNA，包括以下步骤：1、将mRNA Caputre Beads取出，静置使其温度平衡至室温；2、准备RNA样品：在一个Nuclease
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free PCR管中，用RNase
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free的水将0.01
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12.5μg的总RNA稀释至50μL，放冰上备用；3、上下颠倒mRNA Caputre Beads充分混匀；吸取50μL加入到总RNA样品中，混匀；4、将样品置于PCR仪中，65℃5min，25℃5min，4℃保持，使mRNA结合到磁珠上；5、将样品置于磁力架5min，使mRNA与总RNA分离，移除上清液；6、将样品才磁力架取出，加入200μL Beads washbuffer，用移液枪吹打混匀，在磁力架上静置5分钟，移除上清液；
7、将样品从磁力架上取出，加入50μL Tris Buffer重悬磁珠，用移液枪吹打混匀；8、将样品置于PCR仪中，80℃2min，25℃保持，将mRNA洗脱下来；9、加入50μL Bead Binding Buffer，用移液枪吹打混匀；10、室温放置5min，使mRNA结合到磁珠上；11、将样品置于磁力架上5min，使mRNA与总RNA分离；移除上清液；12、将样品从磁力架取出，将入200μL Beads Wash Buffer，混匀，置于磁力架上5min，移除上清液；获得总mRNA。7.一种转录组学标准品细胞株的筛选方法；其特征在于包括以下步骤：步骤一、培养待筛选的目标细胞；具体为：使用含10％胎牛血清，1％双抗，0.5％环丙...
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