一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法技术

本发明专利技术公开了一种胶束电动色谱精准筛选中药提取物中脯氨酰羟化酶2抑制剂的方法，是将脯氨酰羟化酶2溶液、待筛选中药提取物溶液、酶促反应缓冲液依次注入离心管中，随后置于20

【技术实现步骤摘要】
一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法


[0001]本专利技术涉及脯氨酰羟化酶2抑制剂筛选方法和应用，尤其涉及一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法，属于医药


技术介绍

[0002]缺氧是相对机体需求而言，氧气供应不足的一种生理状态，是影响人体健康的因素之一。近年来，有报道称缺氧与各种疾病的发生和演化密切相关，如肾性贫血、癌症、新生血管性眼病、心血管疾病等（文献1：Exp. Cell Res. 2017, 356, 116
‑
121；文献2：Cell. 2019, 176, 1248
‑
1264.）。虽然缺氧是一种潜在的致命因素，但人体也拥有对抗缺氧的防御机制，可以在相对急性或可耐受的情况下维持生存。2019年，诺贝尔生理学或医学奖授予发现动物细胞感知和适应长期缺氧供应的机制研究。缺氧诱导因子（HIF）是该机制中最重要的转录控制复合物之一。它通过在缺氧环境中调节下游基因的表达，使细胞和组织对缺氧做出生理反应（文献3：Annu. Rev. Pathol. 2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法，是将脯氨酰羟化酶2溶液、待筛选中药提取物溶液、酶促反应缓冲液依次注入离心管中，随后置于20
‑
45℃水浴中反应0.5
‑
5小时，取出后加入猝灭剂终止反应，样品于毛细管电泳仪中压力进样，选择背景缓冲液并施加10
‑
30千伏的电压进行分离检测，酶活力用210 nm处产物峰面积表示；待筛选中药提取物可根据产物峰面积的变化判断其是否具有脯氨酰羟化酶2抑制活性。2.如权利要求1所述一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法，其特征在于：所述脯氨酰羟化酶2的EC号为1.14.11.29，表达序列为全序列或包含酶活性中心的序列，其中包含酶活性中心的序列通常为177
‑
426和181
‑
426；脯氨酰羟化酶2的表达系统包括但不限于大肠杆菌表达系统，酵母菌表达系统，昆虫表达系统和哺乳动物表达系统。3.如权利要求1或2所述一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法，其特征在于：脯氨酰羟化酶2的浓度范围为0.1
‑
20μM。4.如权利要求1或2所述一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法，其特征在于：待筛选中药提取物包括但并不限于黄芪、党参、当归、枸杞、川芎、菟丝子的提取液，浓度范围为0.1
‑
100mg/mL。5.如权利要求1或2所述一种从中药提取物中筛选脯氨酰羟化酶2抑制剂的胶束电动色谱方法，其特征在于：酶促反应缓冲液为pH=6.0
‑
9.0，浓度为10
‑
300 mM的磷酸盐、硼酸盐、醋酸盐、碳酸盐、Tris
‑
HCl、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、MOPS、B
‑
R溶液，且酶促...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨军丽，张瑛，王伟峰，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：