γδT细胞的NKG2D/VSTM3作为检测急性髓性白血病标志物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了γδT细胞NKG2D/VSTM3作为检测急性髓性白血病标志物中的应用，属于疾病的诊断和预后评估技术领域。本发明专利技术通过对分析AML患者外周血γδT细胞功能亚群中免疫效应分子NKG2D和抑制性分子VSTM3的表达情况，探讨治疗后AML临床疗效及状态的实验室指标，本发明专利技术是基于目前存在的问题而提出的新的解决方案，具有较好的创新性和科学研究意义。具有较好的创新性和科学研究意义。具有较好的创新性和科学研究意义。

【技术实现步骤摘要】
γδ
T细胞的NKG2D/VSTM3作为检测急性髓性白血病标志物中的应用


[0001]本专利技术属于疾病的诊断和预后评估
，具体涉及γδT细胞NKG2D/VSTM3作为检测急性髓性白血病标志物中的应用。

技术介绍

[0002]急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是一组起源于造血干细胞的恶性克隆增殖性疾病，具有高度异质性，是成人中最为常见的白血病类型。目前AML的治疗主要包括诱导缓解治疗和缓解后巩固治疗。诱导缓解治疗主要使用(1)阿糖胞苷联合蒽环类药物；(2)含中大剂量Ara
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C的诱导治疗方案；(3)三尖杉酯碱联合标准剂量Ara
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C+蒽环类药物方案对AML患者进行治疗，使其获得完全缓解(complete remission，CR)；缓解后巩固治疗的目的是清除体内的微小残留病灶)以及预防疾病的复发，主要包括化学药物治疗和造血干细胞移植。在过去几十年里，随着治疗手段不断改进，AML患者的长期无病生存率和完全缓解率有了很大提高，但对于老年AML患者和部分无移植条件的年轻患者，特别是其伴有不良染色体或基因异常改变，常面临着无法耐受化疗药物及化疗诱导缓解后复发率较高等问题。对于这类患者，新的治疗方案如T细胞过继性免疫治疗有望延长患者的生存时间，具有良好的应用前景。
[0003]gamma delta T细胞(γδT)亚群的异质性决定了其功能的多样性。表明激活的γδT细胞可以通过多种效应机制针对肿瘤细胞发挥杀伤作用，可通过NKG2D(natural killer group 2 member D，NKG2D)信号通路发挥细胞毒作用，介导肿瘤细胞溶解。NKG2D属于NKG2家族的II型跨膜蛋白，以链间二硫键的同源二聚体形式表达，是在所有NK细胞、γδT细胞和CD8
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T细胞均有表达的活化性受体。由杀伤细胞凝集素样受体家族成员1基因编码，位于12号染色体上。多种证据显示肿瘤细胞可诱导NKG2D表达下调而抑制性受体上调，从而抑制免疫细胞的活化从而造成肿瘤免疫逃逸。
[0004]肿瘤发生发展过程中，由于肿瘤抗原的持续刺激，T细胞常表现为耗竭表型，主要表现为细胞表面抑制性受体表达增加，细胞因子及免疫调节细胞数量改变，从而引起肿瘤免疫逃逸。此外，耗竭性T细胞常同时伴有T细胞趋化、粘附、迁移的相关基因表达改变，转录因子表达谱的改变及代谢功能缺陷等特征。耗竭性T细胞功能丢失是一个逐渐发展的过程，随着耗竭严重程度的增加，T细胞表面抑制性受体的数量和种类增多。VSTM3是近年来新发现的一个免疫抑制分子，其在T细胞表面的高表达可抑制T细胞发挥免疫功能。VSTM3基因位于人类第16号染色体，VSTM3蛋白结构由3部分组成，即位于细胞外的胞外IgV结构域、I型跨膜蛋白构成的胞膜跨膜区，以及细胞内由ITIM和免疫球蛋白酪氨酸尾(immunoglobulin tyrosine tail,ITT)样基序构成的胞内信号区。VSTM3是主要表达于大部分T细胞和NK细胞的I型跨膜蛋白，可通过下调T细胞受体α链的表达，降低T细胞内部信号转导幅度，间接抑制T细胞的活化。
[0005]白血病患者体内存在着一定程度的T细胞免疫功能缺陷，如何充分发挥γδT细胞
的抗肿瘤免疫效应，是获得有效的抗AML的γδT细胞过继性免疫治疗策略的关键。目前，尚无关于AML患者外周血γδT细胞功能亚群中免疫效应分子NKG2D和抑制性分子VSTM3的表达情况与AML发病和治疗后AML临床疗效及状态有直接关联的报道。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供γδT细胞NKG2D/VSTM3作为检测急性髓性白血病标志物中的应用，对AML发病的诊断以及治疗后AML临床疗效及状态的判断和临床治疗方案的调整具有重要意义。
[0007]本专利技术提供了γδT细胞的NKG2D/VSTM3作为检测急性髓性白血病标志物中的应用。
[0008]优选的，所述检测急性髓性白血病标志物包括急性髓性白血病发病标志物和/或急性髓性白血病预后评估标志物。
[0009]优选的，所述急性髓性白血病发病标志物为γδT细胞中NKG2D
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VSTM3
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表达。
[0010]优选的，所述急性髓性白血病预后评估标志物为γδT细胞中NKG2D
+
VSTM3
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表达。
[0011]本专利技术提供了检测NKG2D
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VSTM3
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γδT细胞亚群的试剂在制备急性髓性白血病患者预后效果评估的试剂盒中的应用。
[0012]优选的，所述急性髓性白血病患者预后效果评估的方法为当所述NKG2D
+
VSTM3
‑
γδT细胞亚群的细胞比例与治疗前相比显著升高，表示预后效果理想。
[0013]本专利技术提供了检测NKG2D
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VSTM3
+
γδT细胞亚群的试剂在制备急性髓性白血病诊断试剂盒中的应用。
[0014]优选的，所述急性髓性白血病诊断的方法为当所述NKG2D
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VSTM3
+
γδT细胞亚群的细胞比例与健康人相比显著升高，表示存在患急性髓性白血病的风险。
[0015]优选的，所述检测的方法包括流式细胞术。
[0016]优选的，所述试剂包括BV510
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NKG2D流式抗体和BV421
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VSTM3流式抗体。
[0017]本专利技术提供了γδT细胞的NKG2D/VSTM3表达作为检测急性髓性白血病标志物中的应用。本专利技术首次实验证明AML患者外周血中新型的γδT细胞亚群中细胞表面因子表达情况与AML患者的发病与预后效果有关相关。当患者接受治疗后NKG2D
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VSTM3
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γδT细胞亚群表达比例高时，表明AML患者治疗后的临床效果好的可能性较大；而当AML患者外周血NKG2D
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VSTM3
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γδT细胞亚群表达比例高时，患者获得不良预后的可能性大。同时，NKG2D
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VSTM3
+
γδT细胞亚群表达比例高时，相对于健康人而言，更具有发生AML的风险。因此新型的γδT细胞亚群表达比例对于提前诊断AML的发生以及治疗后AML临床疗效及状态的判断和临床治疗方案的调整具有重要的指导意义，本专利技术是基于目前存在的问题而提出的新的解决方案，具有较好的创新性和科学研究意义。
附图说明
[0018]图1为不同临床状态AML患者外周血γδT细胞功能亚群分布情况分析图；
[0019]图2为免疫效应分子NKG2D及NKG2D/VSTM3在AML患者外周血γδT细胞亚群中的表达情况分析图；
[0020]图3为AML患者治疗获得缓解后外周血γδT细胞动态变化结果图。
具体实施方式
[0021]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.γδT细胞NKG2D/VSTM3作为检测急性髓性白血病标志物中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述检测急性髓性白血病标志物包括急性髓性白血病发病标志物和或急性髓性白血病预后评估标志物。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述急性髓性白血病发病标志物为γδT细胞中NKG2D
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VSTM3
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。4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述急性髓性白血病预后评估标志物为γδT细胞中NKG2D
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VSTM3
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。5.检测NKG2D
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VSTM3
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γδT细胞亚群的试剂在制备急性髓性白血病患者预后效果评估的试剂盒中的应用。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述急性髓性白血病患者预后效果评估的方法为当所述NK...

【专利技术属性】
技术研发人员：金真伊，吴秀丽，李扬秋，刘夏鑫，王婉頔，徐玲，陈洁，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：