一种酸枣仁多糖提取物的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种酸枣仁多糖提取物的提取方法，先通过酸枣仁的粉碎，促进酸枣仁中的有效成分充分游离，从根本上保证多糖的充分提取，接着借助超临界CO2萃取对酸枣仁粉末进行脱脂处理，实现有效脱脂，再通过蛋白酶酶解和Sevag法结合除去大部分蛋白质，醇沉得到酸枣仁粗多糖，然后将酸枣仁粗多糖利用氟修饰磁性微球进行纯化得到酸枣仁多糖提取物。本发明专利技术的方法提取率高，且所得多糖的纯度高，品质好，适合大规模生产。合大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种酸枣仁多糖提取物的提取方法


[0001]本专利技术属于多糖提取
，具体涉及一种酸枣仁多糖提取物的提取方法。

技术介绍

[0002]多糖是由至少10个以上的单糖由糖苷键结合组成的聚合糖高分子碳水化合物，可用通式(C6H
10
O5)
n
表示。多糖是生物体的重要组成部分，是生命体的能量提供来源和组织构成成分，可参与到细胞间识别、机体免疫功能的调节、细胞的转化、肿瘤细胞的凋亡等生物学过程，多糖具有抗肿瘤、调节机体免疫力、降血糖血脂、抗氧化、抗炎、镇痛、抗辐射等重要生理功效。
[0003]酸枣仁为鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子，秋季果实成熟时采收，将果实浸泡一宿，搓去果肉，捞出，用石碾碾碎果核，取出种子，晒干。酸枣仁味甘，性平，具宁心安神、养肝、敛汗生津之功效。主治虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴，是一种常用中药。酸枣仁主要含有黄酮和皂苷等镇静催眠有效成分，临床上酸枣仁主要以生品和炒制品入药。
[0004]酸枣仁除了多糖，还含脂肪油、蛋白质等，故从酸枣仁中提取多糖成分时，最重要的就是分离脂肪油和蛋白质等，以免影响多糖纯度，对多糖的进一步利用产生阻碍。
[0005]专利申请CN107674127A公开了酸枣仁多糖的制备方法，先将酸枣仁药材干燥粉末并加溶剂石油醚或乙醚于反应容器中，70℃
‑
90℃加热回流两次，每次1
‑
2h，脱去脂肪类物质，过滤，残渣烘干；取上述残渣质量百分含量为70％乙醇水溶液回流提取2h，除去黄酮、皂苷等杂质，过滤，滤渣烘干备用；然后将滤渣固体加入纯水，在40
‑
70℃，180
‑
240W下超声辅助提取30
‑
50min，过滤，滤液备用；最后将滤液减压浓缩，得浓缩液；在浓缩液中加入质量浓度95％乙醇，4℃下冷藏过夜，过滤得到沉淀，用乙醇洗涤沉淀多次并边洗涤边搅拌，然后用丙酮洗涤多次并边洗涤边搅拌，干燥，得到黄褐色酸枣仁粗多糖。该专利申请对酸枣仁中多糖的提取率低，所得多糖纯度低，且存在生产放大效应，限制了大规模生产应用。
[0006]该专利申请公开了酸枣仁多糖可用于抗肿瘤治疗，申请人发现酸枣仁多糖提取物的纯度直接关系到抗肿瘤效果，故提高酸枣仁多糖提取物的纯度对于未来的临床应用具有非常重要的意义。

技术实现思路

[0007]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种酸枣仁多糖提取物的提取方法，提取率高，且所得多糖的纯度高，品质好，适合大规模生产。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0009]一种酸枣仁多糖提取物的提取方法，具体步骤如下：
[0010](1)先将酸枣仁粉碎成80～100目的酸枣仁粉末并加入水中，微波萃取，减压浓缩，转移至喷雾干燥塔中干燥，得到酸枣仁粉末；
[0011](2)接着利用超临界CO2萃取对酸枣仁粉末进行脱脂处理，得到脱脂酸枣仁粉末；
[0012](3)将步骤(2)脱脂的酸枣仁粉末加入水中，微波提取，离心取上清，得到提取液，
继续向提取液加入蛋白酶酶解，灭酶，浓缩至提取液原体积的1/4～1/3，得到酶解液，利用Sevag法除去酶解液中的大部分蛋白质，得到脱脂脱蛋白提取液，醇沉，即得酸枣仁粗多糖；
[0013](4)然后将步骤(3)所制备的酸枣仁粗多糖加入水中，搅拌均匀，加入氟修饰磁性微球，超声波分散均匀，再加入无水乙醇，振摇1～2分钟，析出沉淀并使用磁铁吸附分离，接着将这些沉淀超声波分散于水中，磁铁吸附除去磁性微球，喷雾干燥，即得酸枣仁多糖提取物。
[0014]优选的，酸枣仁粉末、蛋白酶、氟修饰磁性微球的质量比为3～4：0.2～0.3：0.02～0.03。
[0015]进一步优选的，所述蛋白酶是将中性蛋白酶与木瓜蛋白酶按照质量比3：1均匀混合而得。
[0016]优选的，步骤(1)中，微波萃取的工艺条件为：300～400W微波萃取5～10分钟。
[0017]优选的，步骤(1)中，超音速射流的工艺条件为：40～50℃，0.05～0.07MPa，速度800～900m/s。
[0018]优选的，步骤(2)中，超临界CO2萃取的工艺条件为：萃取压力38～40MPa，萃取温度50～52℃，CO2流量为10～15kg/h，萃取时间2～3小时，分离压力5～6MPa，分离温度55～57℃。
[0019]优选的，步骤(3)中，微波提取的工艺条件为：300～400W微波提取25～30分钟。
[0020]优选的，步骤(3)中，酶解的工艺条件为：55～60℃酶解3～4小时。
[0021]优选的，步骤(3)中，Sevag法的具体方法为：向酶解液中加入等体积的Sevag试剂，剧烈震荡，离心取上清，即为所述的脱脂脱蛋白提取液；其中，Sevag试剂是将三氯甲烷和正丁醇按照体积比5：1混匀而得。
[0022]优选的，步骤(3)中，醇沉的具体方法为：向脱脂脱蛋白提取液中加入其3～4倍体积的体积分数90～95％乙醇水溶液，0～4℃静置12～15小时，离心取沉淀即可。
[0023]优选的，步骤(4)中，以重量份计，所述氟修饰磁性微球的制备方法如下：
[0024](A)先将1份纳米四氧化三铁加入30～40份0.2～0.3mol/L柠檬酸钠溶液中，300～400W超声波分散40～50分钟，磁分离，得到柠檬酸钠修饰的纳米四氧化三铁；
[0025](B)再将柠檬酸钠修饰的纳米四氧化三铁超声分散于4～5份水中，倒入25～30份液态硅酸钠中，搅拌混匀，得到水相；接着将1.5～2份OP
‑
10、5～6份司盘
‑
80加入55～60份二氯甲烷中，搅拌混匀，得到油相；边搅拌边将水相缓慢滴入油相中，得到乳液，边搅拌边将乳液缓慢滴入2～3mol/L硫酸铵水溶液中，400～500r/min搅拌2～3小时，磁吸出固体物质，并用水洗涤2～3次，得到磁性微球；
[0026](C)最后将磁性微球超声分散于35～45份体积浓度70～80％乙醇溶液中，继续加入0.2～0.3份全氟癸基三甲氧基硅烷，加热至回流，保温搅拌4～5小时，磁吸出固体物质，无水乙醇洗涤，干燥，即得。
[0027]本专利技术还要求保护利用上述提取方法得到的一种酸枣仁多糖提取物。
[0028]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0029](1)本专利技术采用超临界CO2萃取替换常见的有机溶剂脱脂方法，安全，无毒，脱脂效果好，脱脂彻底，为后续多糖提取提供良好的基础，提高多糖的提取率和纯度。
[0030](2)本专利技术采用蛋白酶和Sevag法结合除去大部分蛋白质，先蛋白酶酶解可以将提
取液汇总含有的大分子蛋白质进行降解，减少对多糖成分的缠绕、包裹，促使多糖游离出来，结合Sevag法即可除去大部分蛋白质，在此之后醇沉，大大减少了蛋白质成分在多糖表面的黏附，提高多糖纯度。
[0031](3)本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酸枣仁多糖提取物的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)先将酸枣仁粉碎成80～100目的酸枣仁粉末并加入水中，微波萃取，减压浓缩，转移至喷雾干燥塔中干燥，得到酸枣仁粉末；(2)接着利用超临界CO2萃取对酸枣仁粉末进行脱脂处理，得到脱脂酸枣仁粉末；(3)将步骤(2)脱脂的酸枣仁粉末加入水中，微波提取，离心取上清，得到提取液，继续向提取液加入蛋白酶酶解，灭酶，浓缩至提取液原体积的1/4～1/3，得到酶解液，利用Sevag法除去酶解液中的大部分蛋白质，得到脱脂脱蛋白提取液，醇沉，即得酸枣仁粗多糖；(4)然后将步骤(3)所制备的酸枣仁粗多糖加入水中，搅拌均匀，加入氟修饰磁性微球，超声波分散均匀，再加入无水乙醇，振摇1～2分钟，析出沉淀并使用磁铁吸附分离，接着将这些沉淀超声波分散于水中，磁铁吸附除去磁性微球，喷雾干燥，即得酸枣仁多糖提取物。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，酸枣仁粉末、蛋白酶、氟修饰磁性微球的质量比为3～4：0.2～0.3：0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈尚龙，蔡望秋，李超，陈安徽，邵颖，张文莉，师聪，刘恩岐，
申请(专利权)人：徐州工程学院，
类型：发明
国别省市：