一种检测重组组合抗体含量比例、电荷异质性和/或等电点的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测重组组合抗体(MabPair)的含量比例、电荷异质性和/或等电点的方法，包括以下步骤：1)取重组组合抗体作为供试品；2)使用供试品配制用于全柱成像毛细管等电聚焦(iCIEF)检测的分析样品混合液，通过iCIEF系统进行检测，实时采集等电聚焦图谱；3)根据步骤2)中的等电聚焦图谱，计算待分析重组组合抗体中单抗的含量比例、电荷异质性和/或等电点。本发明专利技术所使用的方法具有检测效率高、分离效果好、重复性优、稳定性强、成本低等优点，并且可实现组合抗体中两个单抗的完全分离，适用于重组组合抗体的含量比例计算和质量控制。控制。控制。

【技术实现步骤摘要】
一种检测重组组合抗体含量比例、电荷异质性和/或等电点的方法


[0001]本专利技术属于生物制品分离分析领域，具体涉及一种全柱成像毛细管等电聚焦(iCIEF)测定重组组合抗体(MabPair)中两种单抗的含量比例、两种单抗各自电荷异质性和/或等电点(pI)的方法。

技术介绍

[0002]近年来，随着DNA重组技术的成熟和快速发展以及工业化大规模细胞培养技术瓶颈的突破，重组蛋白类药物尤其治疗性单克隆抗体药物用于治疗肿瘤及自身免疫性疾病已成为生物医药领域研发的热点之一。
[0003]哺乳动物细胞表达的单抗产品多存在翻译后修饰现象，如糖基化修饰、脱氨基、脱酰胺、氧化、焦谷氨酸化等。重组单抗产品多属于糖蛋白，其糖基化和糖结构与其体内稳定性密切相关，关键位点的脱酰胺、氧化等翻译后修饰可能会影响产品的生物学活性。在生产过程中，宿主细胞、培养基组成、培养条件、培养环境和蛋白质结构以及分离纯化工艺都可能会影响重组单抗产品的多种翻译后修饰水平。
[0004]治疗性单抗类生物药物因多种翻译后修饰水平及糖基化的差异，产生多种电荷异质体，每种电荷异质体对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测重组组合抗体(MabPair)的含量比例、电荷异质性和/或等电点的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取重组组合抗体作为供试品；2)使用供试品配制用于全柱成像毛细管等电聚焦(iCIEF)检测的分析样品混合液，通过iCIEF系统进行检测，实时采集等电聚焦图谱；3)根据步骤2)中的等电聚焦图谱，计算待分析重组组合抗体中单抗的含量比例、电荷异质性和/或等电点。2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1)中的重组组合抗体是由同一细胞株采用同一生产工艺生产，含有预定比例含量的两种单抗组合产物；优选地，所述分析样品混合液中组合抗体的蛋白终浓度为0.1
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1mg/ml。3.如权利要求1或2所述方法，其特征在于，在步骤1)中，若重组组合抗体样品处理后所含盐浓度>15mM，则进行超滤浓缩脱盐处理后作为供试品。4.如权利要求1或2所述方法，其特征在于，在步骤2)中，所述分析样品混合液包含供试品、载体两性电解质和凝胶载体基质；优选地，所述分析样品混合液还包含助溶剂和/或等电点标记物。5.如权利要求4所述方法，其特征在于，步骤2)中的载体两性电解质由一种或两种以上两性电解质组成，优选由两种两性电解质组成；更优选地，所述载体两性电解质由比例25％
‑
75％的pH 3
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10和比例75％
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25％的pH 8
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10.5两性电解质组成；更优选地，所述载体两性电解质在分析样品混合液中的体积含量为2％

【专利技术属性】
技术研发人员：王庆民，刘振东，杨勇，韩国华，孟旭，卜令丽，安振明，孙丽霞，
申请(专利权)人：齐鲁制药有限公司，
类型：发明
国别省市：