一种高通量自动化的单细胞蛋白质组样品处理方法技术

本发明专利技术涉及一种自动化的高通量单细胞蛋白质组样品处理方法，是一种在液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种高通量自动化的单细胞蛋白质组样品处理方法


[0001]本专利技术涉及一种高通量自动化的单细胞蛋白质组学样品处理方法，是一种结合高通量单细胞分选、原位单细胞蛋白质样品处理、紫外辅助快速酶解以及全自动化上样的方法，旨在提高单细胞蛋白质组样品处理的回收率和分析通量。

技术介绍

[0002]细胞是生命体最基本的功能单元。由于遗传信息表达随机性以及微环境变化等因素，细胞之间的异质性普遍存在，并在生物发育和疾病发展等过程中起着关键作用。基于群体细胞的常规分析反映的是平均值，往往会掩盖细胞间的差异，因此需要在单细胞水平上研究细胞的异质性。然而，单细胞蛋白质组的规模化分析面临着巨大挑战：单个细胞的蛋白质含量极低，且无法像基因一样进行扩增；同一细胞中存在多种类型的蛋白质及其修饰，其丰度差异往往跨越10个数量级；只有对大量单细胞中的多种蛋白质进行定量分析，才能提供足够的数据发现复杂群体中的细胞异质性和功能特征，并揭示细胞间重要的相互作用。因此，单细胞蛋白质组学分析对灵敏度和通量有极高的要求。
[0003]目前，基于抗体的方法适合用于分析单细胞中感兴趣的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高通量自动化的单细胞蛋白质组样品处理方法，其特征在于：将单细胞分选至带有96个孔及以上的孔板内，在自动化移液工作站上进行原位单细胞蛋白质提取和紫外辅助酶解操作；然后，通过孔板直接上样的方式实现蛋白质酶解产物的NanoLC
‑
MS分析，从而实现单细胞蛋白质组样品处理和LC
‑
MS分析全流程的自动化。2.按照权利要求1所述的单细胞蛋白质组样品处理方法，其特征在于：具体流程为：首先通过细胞分选技术将单细胞分选至孔板中，利用加热
‑
冷却循环实现单细胞的裂解，然后在孔内进行原位样品处理，加入质谱兼容的表面活性剂实现蛋白质的提取，最后通过自动化移液工作站在各个样品孔中加入胰酶，并在紫外灯光照下实现蛋白质的快速酶解；孔板中的酶解产物直接通过纳升液相色谱(Nano
‑
LC)进样器完成自动上样。3.按照权利要求1或2所述的单细胞蛋白质组样品处理方法，其特征在于：通过高通量细胞分选技术将单细胞分选至PCR孔板中，具体为流式细胞荧光分选(FACS)、磁性活化细胞分选(MACS)、拉曼激活细胞分选(RACS)、微流控分选中的一种或两种以上。4.按照权利要求2所述的单细胞蛋白质组样品处理方法，其特征在于：通过多次加热与冷冻循环实现细胞的原位裂解，加热温度为60
‑
95℃，加热时间为1
‑
30分钟；冷冻温度为
‑
20至
‑
80℃，冷冻时间为1
‑
30分钟；加热
‑
冷冻循环次数为3
‑
5次。5.按照权利要求1或2所述的单细胞蛋白质组样品处理方法，其特征在于：通过自动化...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，贺映云，袁辉明，戴忠鹏，杨开广，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：