一种紫纹兜兰非共生萌发培养基及培养方法技术

本发明专利技术涉及植物种子繁殖技术领域，公开了一种紫纹兜兰非共生萌发培养基及培养方法。本发明专利技术的紫纹兜兰非共生萌发培养基配方为：1/4MS+20～30g/L蔗糖+7～8g/L琼脂粉+100～150ml/L新鲜椰汁+0.1～0.3mg/L6

【技术实现步骤摘要】
一种紫纹兜兰非共生萌发培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及植物种子繁殖
，特别涉及一种紫纹兜兰非共生萌发培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]紫纹兜兰(Paphiopedilum purpuratum)隶属于兰科(Orchidaceae)兜兰属(Paphiopedilum)，是国家Ⅰ级重点保护野生植物。主要分布于广东南部、广西南部、香港以及云南东南部等地。紫纹兜兰在野外可通过种子繁殖和分株繁殖，自然条件下细小如尘的种子需要与真菌共生才能萌发，萌发率较低，且分株繁殖的方式使得紫纹兜兰种群分布狭窄，极容易被成片采挖，造成种群的消失。有学者通过调查研究发现，由于生境的破坏以及人为的采挖，紫纹兜兰在野外的种群数量已经十分稀少，处于濒危状态，亟待人工辅助其繁殖。
[0003]无菌萌发是繁殖兜兰最有效的一种方法，目前，已有多个研究报道了多种兜兰通过无菌萌发成功获得试管苗。例如王莲辉等(2010年)的报道表明，1/2MS+椰乳的组合对小叶兜兰的种子的萌发率较高；周丽等(2012年)的报道发现格力兜兰种子萌发最佳培养基为1/2RE+6
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BA+NAA+椰乳+水解酪蛋白组合；胡琦敏等(2016年)对海伦兜兰无菌播种与组培的研究发现,最适种子萌发培养基为1/2MS+香蕉泥。由此可见，某种兜兰成功萌发的无菌播种方法对其它兜兰并不具有适应性，兜兰属中包括紫纹兜兰在内的多个种仍未探索到较为理想的无菌萌发方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种紫纹兜兰非共生萌发培养基及培养方法，提高紫纹兜兰种子的萌发率，减少萌发过程中原球茎发生褐化和死亡的现象，达到了有效提高成苗率的效果。
[0005]本专利技术为了解决上述技术问题，提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供一种紫纹兜兰非共生萌发培养基，所述培养基配方为：1/4MS+20～30g/L蔗糖+7～8g/L琼脂粉+100～150ml/L新鲜椰汁+0.1～0.3mg/L6
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BA+0.05～0.15mg/L NAA，pH6.0～7.0。
[0007]优选的，所述培养基的配方为1/4MS+20g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+100ml/L新鲜椰汁+0.2mg/L 6
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BA+0.1mg/L NAA，pH6.0。
[0008]本专利技术还提供了一种紫纹兜兰种子非共生萌发的培养方法，将紫纹兜兰种子散落在上述萌发培养基上进行培养，待种子分化成带有2
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3片叶片的原球茎时，转培养基进行生根壮苗培养，直至长出小苗。
[0009]优选的，所述培养的条件为：光照时间9～11h/d，光照强度1600
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1700LUX，温度25
‑
26℃。
[0010]优选的，所述种子萌发的时间为90
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100天。
[0011]优选的，所述原球茎的培养时间为90
‑
100天。
[0012]优选的，所述紫纹兜兰种子的获取方法包括：采集生长时间为9
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10个月的紫纹兜兰果荚，低温存放后，去除果荚表面绒毛，消毒后切开，得到紫纹兜兰的种子。
[0013]优选的，所述小苗经炼苗后移栽至基质中，所述基质配方为等体积比混合的腐殖土和松树皮。
[0014]进一步优选的，所述炼苗的时间为10
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15天，炼苗时的空气湿度为60％～80％，双层75％的遮荫网遮荫。
[0015]优选的，所述小苗在移栽前用多菌灵浸泡消毒。
[0016]相对于现有技术，本专利技术具有如下技术效果：
[0017]本专利技术的紫纹兜兰非共生萌发培养基通过在培养基中添加有机物椰汁和一定浓度的激素，给紫纹兜兰种子提供丰富的营养物质，种子萌发率能够达到78.13％，同时促进原球茎的分化。当原球茎分化出2
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3片叶片(植株生长至2～4mm)时转培养基进行生根壮苗培养，此时换瓶能明显减少原球茎发生褐化的现象，提高成苗率。
[0018]本专利技术还提供了紫纹兜兰种子非共生萌发的培养方法，通过将紫纹兜兰的种子接种于特定的萌发培养基下，使其萌发成原球茎，将所得到的原球茎转接至新的培养基上进行生根壮苗，得到紫纹兜兰无菌试管苗。本专利技术的方法能提高紫纹兜兰种子的萌发率，减少萌发过程中原球茎发生褐化和死亡的现象，达到了有效提高成苗率的效果，可为紫纹兜兰的保育研究提供一定的技术基础。
附图说明
[0019]图1为本专利技术采用的紫纹兜兰果荚示意图。
[0020]图2为体视镜下的紫纹兜兰种子示意图。
[0021]图3为紫纹兜兰种子在萌发分化阶段获得的绿色原球茎示意图。
[0022]图4为紫纹兜兰在生根壮苗阶段发生增殖分化的示意图。
[0023]图5为紫纹兜兰移栽前的示意图。
[0024]图6为紫纹兜兰移栽后正常生长的示意图。
具体实施方式
[0025]本专利技术提供了一种紫纹兜兰非共生萌发培养基，所述培养基配方为：1/4MS+20～30g/L蔗糖+7～8g/L琼脂粉+100～150/L新鲜椰汁+0.1～0.3mg/L6
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BA+0.05～0.15mg/L NAA，pH6.0～7.0。进一步优选的，所述培养基配方为1/4MS+20g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+100～150ml/L新鲜椰汁+0.2mg/L6
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BA+0.1mg/L NAA，pH6.0。
[0026]本专利技术的紫纹兜兰非共生萌发培养基中添加有机物椰汁和一定浓度的激素，给紫纹兜兰种子提供丰富的营养物质，提高了紫纹兜兰种子的非共生萌发率，同时促进了原球茎的分化，降低了褐化率。
[0027]本专利技术还提供了一种紫纹兜兰种子非共生萌发的培养方法，将紫纹兜兰种子散落在上述萌发培养基上进行培养，待种子分化成带有2
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3片叶片的原球茎时，转培养基进行生根壮苗培养，直至长出小苗。
[0028]本专利技术对紫纹兜兰种子的来源没有特别限定，优选采集生长时间为9
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10个月的紫
纹兜兰果荚低温存放后，去除果荚表面绒毛，消毒后切开，得到紫纹兜兰的种子。本专利技术将紫纹兜兰果荚低温存放促进种子萌发，优选低温存放的时间为24
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48h。作为一种实施方式，本专利技术将低温存放的果荚用大量自来水冲洗，同时用柔软的毛刷刷去表面绒毛，便于果荚的消毒。作为一种实施方式，本专利技术紫纹兜兰果荚的消毒方式为先用酒精消毒，再用升汞消毒；具体的，在超净工作台上用75％的酒精棉球擦拭5
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10min，再用0.13％的升汞浸泡15
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20min，无菌水洗去药剂后用滤纸擦干果荚。最后用无菌刀将果荚对半切开，得到紫纹兜兰的种子。
[0029]作为一种实施方式，本专利技术用无菌镊子蘸取少量种子，轻敲培养瓶瓶口使种子均匀的散落在萌发培养基上进行培养。优选培养条件为光照时间9～11h/d，光照强度160本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种紫纹兜兰非共生萌发培养基，其特征在于，所述培养基配方为：1/4MS+20～30g/L蔗糖+7～8g/L琼脂粉+100～150ml/L新鲜椰汁+0.1～0.3mg/L 6
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BA+0.05～0.15mg/L NAA，pH6.0～7.0。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基的配方为1/4MS+20g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+100～150ml/L新鲜椰汁+0.2mg/L 6
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BA+0.1mg/L NAA，pH6.0。3.一种紫纹兜兰种子非共生萌发的培养方法，其特征在于，将紫纹兜兰种子散落在权利要求1或2所述培养基上进行培养，待种子分化成带有2
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3片叶片的原球茎时，转培养基进行生根壮苗培养，直至长出小苗。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述培养的条件为：光照时间9～11h/d，光照强度1600
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【专利技术属性】
技术研发人员：易绮斐，林春惠，潘发光，陈红锋，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：