VRK1表达抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体公开了VRK1表达抑制剂及其应用。shRNA分子，其序列中正义链序列为5'

【技术实现步骤摘要】
VRK1表达抑制剂及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及VRK1表达抑制剂及其应用。

技术介绍

[0002]VRK1是一种多功能蛋白，是牛痘相关激酶(VRK)家族丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的成员。它大部分位于核内具有非典型活性的Ser
‑
Thr激酶，核小体激酶或染色质激酶，可以与不同的染色质蛋白直接稳定的相互作用，并与细胞周期进入、促进DNA损伤修复、耐药有密切关系；小部分位于质膜，与细胞迁移有关。它调控多种转录因子，包括SOX2、ATF2、p53和c
‑
Jun。研究表明，VRK1与SOX2形成复合物共同激活CCND1的表达，促进细胞周期进程。电离辐射产生的DNA损伤会触发VRK1对NBS1的磷酸化，从而促进DNA修复过程。阿霉素诱导VRK1和53BP1之间形成复合物，从而启动DNA损伤修复，使细胞产生耐药。VRK1过表达在质膜上和PAK1
‑
paxillin信号复合物的一部分，可通过调控转录抑制因子snail、slug和twist1促进乳腺癌细胞的转移。现有研究表明，过表达VRK1会诱发一些疾病，通过控制VRK1能够对相应疾病起到治疗作用，但VRK1作为膀胱癌治疗靶点的研究仍然是空白。
[0003]VRK家族的三个成员的结构已经确定，他们的激酶折叠有几个结构差异，预测他们应该对目前可用的大多数抑制剂不敏感。用针对VRK1 mRNA的shRNA可以抑制VRK1的翻译，并且毒性低，是极具潜能的靶向干预策略。
[0004]每年有超过43万名患者被诊断出患有膀胱癌，其中约16.5万人将因此死亡。虽然根治性全膀胱切除手术的应用在生存率方面已取得长足的进步，但其5年生存率仍然相对较低。术后肿瘤的复发和进展是影响这些患者预后的主要临床事件。近期分子谱研究证实其实一类具有高体细胞突变率的疾病，肿瘤细胞膜上表达蛋白的高突变负荷形成了多种肿瘤抗原，因此目前仍缺乏有效的临床治疗方案彻底杀死并清除肿瘤细胞，寻找能提示膀胱癌预后指标以及能一次干预多个肿瘤细胞行为学特征的靶点至关重要。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术提供VRK1表达抑制剂及其应用，主要涉及一种新的shRNA分子，以及在VRK1中的调节作用，同时还要解决肿瘤(包括膀胱癌)的防治调节问题。
[0006]为了解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]shRNA分子，其序列中
[0008]正义链序列为5'
‑
GCAAGGAACCTGGTGTTGA
‑
3'(SEQ ID NO：1)，
[0009]反义链序列为5'
‑
TCAACACCAGGTTCCTTGC
‑
3'(SEQ ID NO：2)。
[0010]一些方式中，其具有如下序列：
[0011]5'
‑
tGCAAGGAACCTGGTGTTGAttcaagagaTCAACACCAGGTTCCTTGCtttttggaaac
‑
3'(SEQ ID NO：3)。
[0012]重组质粒或构建体，包含SEQ ID NO：3序列，或由前述的shRNA分子与质粒组成。
[0013]VRK1基因表达抑制剂，至少包含下述之一
[0014]a.前述shRNA分子；
[0015]b.前述重组质粒。
[0016]VRK1基因沉默试剂盒，包含前述的抑制剂。
[0017]VRK1基因表达抑制剂在制备防治膀胱癌药物中的应用。
[0018]一种方式中，VRK1基因表达抑制剂至少为shRNA或siRNA或miRNA或多肽。
[0019]一些方式中，所述VRK1基因表达抑制剂至少包含下述之一
[0020]a.前述shRNA分子；
[0021]b.前述重组质粒。
[0022]一些方式中抑制剂对膀胱癌调节至少为下述任一
[0023]i)抑制膀胱癌细胞增殖、克隆形成；
[0024]ii)抑制膀胱癌细胞转移、侵袭。
[0025]质粒在制备防治膀胱癌药物中的应用，其中，所述质粒至少为下述之一
[0026]a.前述任一shRNA分子；
[0027]b.前述重组质粒。
[0028]质粒在制备防治VRK1过表达诱发疾病药物中的应用，其中，所述质粒至少为下述之一
[0029]a.前述任一shRNA分子；
[0030]b.前述重组质粒。
[0031]质粒在制备抑制肿瘤细胞向间质型转变疾病药物中的应用，其中，所述质粒至少为下述之一
[0032]a.前述任一shRNA分子；
[0033]b.前述重组质粒。
[0034]防治膀胱癌药物，包含前述的VRK1基因表达抑制剂。
[0035]VRK1蛋白表达抑制剂，包含下述中至少两种
[0036]I).siVRK1:5
′‑
GCAAGGAACCTGGTGTTGA
‑3′
，
[0037]5′‑
TCAACACCAGGTTCCTTGC
‑3′
；
[0038]II).shVRK1
‑
1:5
′‑
tGAAAGAGAGTCCAGAAGTAttcaagagaTACTTCTGGACTCTCTTTCtttttggaa ac
‑3’
(SEQ ID NO：4)；
[0039]III).shVRK1
‑
2:5
′‑
tGCAAGGAACCTGGTGTTGAttcaagagaTCAACACCAGGTTCCTTGCtttttggaaac
‑3′
(SEQ ID NO：3)。
[0040]前述混合型VRK1蛋白表达抑制剂在制备防治膀胱癌药物中的应用。
[0041]术语“构建体”是指含有相应特定分子序列且用于构建质粒的中间体，比如构建重组质粒或蛋白表达载体。
[0042]术语“shVRK1”是指VRK1特异性shRNA分子。
[0043]术语“基因(蛋白)过表达诱发疾病”是指过表达对该病起到了致病性，并且可以通过抑制该种过表达机理实现对相应病症的抑制。
[0044]术语“防治”是指对患者进行的意图治愈、改善、稳定或预防疾病、病理状况或障碍的医疗管理。该术语包括积极治疗，即治疗特别指向疾病、病理状况或障碍的改善，并且还包括病因治疗，即治疗指向去除相关疾病、病理状况或障碍的病因。此外，该术语还包括姑
息治疗，即为减轻症状而不是治愈疾病、病理状况或障碍而设计的治疗；预防性治疗，即旨在尽量最小化或者部分或完全抑制相关疾病、病理状况或障碍发展的治疗；和支持治疗，即用于补充指向相关疾病、病理状况或障碍的改善的另一种特定疗法的治疗。
[0045]本专利技术的有益效果是：
[0046]提供了一种新的shRNA分子，并研本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.shRNA分子，其特征在于，其序列中正义链序列为SEQ ID NO：1：5'
‑
GCAAGGAACCTGGTGTTGA
‑
3'，反义链序列为SEQ ID NO：2：5'
‑
TCAACACCAGGTTCCTTGC
‑
3'。2.根据权利要求1所述的shRNA分子，其特征在于，其具有如下序列SEQ ID NO：3：5'
‑
tGCAAGGAACCTGGTGTTGAttcaagagaTCAACACCAGGTTCCTTGCtttttggaaac
‑
3'。3.重组质粒或构建体，其特征在于，包含权利要求2中SEQ ID NO：3序列，或由权利要求1
‑
2任一所述的shRNA分子与质粒组成。4.VRK1蛋白表达抑制剂，其特征在于，至少包含下述之一a.权利要求1或2所述shRNA分子；b.权利要求3中所述重组质粒。5.VRK1基因沉默试剂盒，其特征在于，包含权利要求4所述的抑制剂。6.VRK1基因表达抑制剂在制备防治膀胱癌药物中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其中，VRK1基因表达抑制剂至少为shRNA或siRNA或miRNA或多肽。8.根据权利要求7所述的应用，其中，所述VRK1基因表达抑制剂至少包含下述之一a.权利要求1或2所述shRNA分子；b.权利要求3中所述重组质粒。9.根据权利要求6所述的应用，其中，抑制剂对膀胱癌调节至少为下述任一i)抑制膀胱癌细胞增殖、克隆形成；ii)抑制膀胱癌细胞转移、侵袭。10....

【专利技术属性】
技术研发人员：吴佳成，胡宝英，王小林，
申请(专利权)人：南通市肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：