一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，包括以下步骤：（1）制备脐带间充质干细胞因子浓缩液；（2）向脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂混合均匀；所述保护剂包括以下重量份的原料：小球藻粉3.5

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法


[0001]本专利技术涉及干细胞领域，尤其涉及一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是具有高度自我更新能力和多项分化潜能的多能干细胞，广泛存在于骨髓、脂肪、羊膜液、胎盘、脐带血及脐带组织中。脐带间充质干细胞是存在于新生儿脐带华通氏胶和血管周围组织中的一种间充质干细胞。来源于脐带的间充质干细胞取材方便，无道德伦理争议，增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，不仅可以应用到临床治疗中，而且其细胞培养过程中产生的培养上清液也具有非常好的美容护肤作用。
[0003]脐带间充质干细胞培养上清液含有大量的细胞生长因子等营养物质，能够有效的促进皮肤细胞的新陈代谢，促进表皮细胞的生长、分化和修复，同时能够加速角质层修复，加速基底新老细胞更替，在美容修复领域具有极其广阔的应用前景。
[0004]现有技术中已有很多利用脐带间充质干细胞因子溶液作为生物美容原料的研究，但目前市面上对该类因子的应用较为简单，由于干细胞因子在溶液中稳定性不佳，活性极易下降而失效，不利于作为生物美容原料应用。为了便于细胞因子的有效保存，可以采用冻干的方式得到细胞因子冻干粉。但是冻干过程会损伤细胞因子的活性，导致冻干后的细胞因子含量低，不稳定，无法长时间保存等，影响应用效果。因此有必要研究一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，提高冻干粉中细胞因子的稳定性，延长保存时间。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，能有效保证冻干粉中细胞因子的稳定性，延长保存时间，操作简便，易于实现。
[0006]本专利技术的目的采用如下技术方案实现：一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，包括以下步骤：（1）制备脐带间充质干细胞因子浓缩液；（2）向脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂混合均匀；所述保护剂包括以下重量份的原料：小球藻粉3.5
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5.5份、银杏内酯B1.7
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3.2份、生育酚乙酸酯0.4
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0.8份、木糖醇5
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8份；（3）冷冻干燥得到脐带间充质干细胞因子冻干粉。
[0007]进一步地，所述保护剂包括以下重量份的原料：小球藻粉4.5份、银杏内酯B2.4份、生育酚乙酸酯0.5份、木糖醇6份。
[0008]进一步地，每10mL脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂0.8
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1.4g。
[0009]进一步地，每10mL脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂1.1g。
[0010]进一步地，所述脐带间充质干细胞因子浓缩液采用以下方法制备得到：A：取传代培养收获的脐带间充质干细胞接种至培养基中，在低氧条件下进行培养，当细胞融合度达到75
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85%后收集培养上清液；B：将收集的培养上清液过滤后采用超滤膜进行透析，收集截留液即为脐带间充质干细胞因子浓缩液。
[0011]进一步地，所述培养基包括DMEM/F12培养基和添加在培养基中的以下成分：L
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谷氨酰胺5
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10μg/mL、胰岛素10
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15μg/mL、右旋糖苷7.5
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12μg/mL、L
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抗坏血酸20
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30ng/mL。
[0012]进一步地，所述低氧培养条件为：5
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8%O2，5%CO2，37℃。
[0013]进一步地，步骤B中先用0.22μm滤膜过滤，然后再用40
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50KD的超滤膜进行透析，透析液再过50
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80D的超滤膜，收集截留液即得脐带间充质干细胞因子浓缩液。
[0014]进一步地，所述传代培养收获的脐带间充质干细胞为P1
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P5代细胞。
[0015]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，在脐带间充质干细胞因子的浓缩液中加入保护剂：小球藻粉、银杏内酯B、生育酚乙酸酯、木糖醇，提高冻干粉中细胞因子的含量和稳定性，延长细胞因子产品的保存时间，为脐带间充质干细胞因子的各种应用提供保障。
具体实施方式
[0016]下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
[0017]实施例1一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，包括以下步骤：（1）制备脐带间充质干细胞因子浓缩液；A：取传代培养收获的P3代脐带间充质干细胞接种至培养基中，培养基包括DMEM/F12培养基和添加在培养基中的以下成分：L
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谷氨酰胺8μg/mL、胰岛素12μg/mL、右旋糖苷9.5μg/mL、L
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抗坏血酸25ng/mL，在7%O2，5%CO2，37℃条件下进行培养，当细胞融合度达到80%后收集培养上清液；B：将收集的培养上清液先用0.22μm滤膜过滤，然后再用45KD的超滤膜进行透析，透析液再过60D的超滤膜，收集截留液即得脐带间充质干细胞因子浓缩液。
[0018]（2）向脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂混合均匀，每10mL脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂1.1g；保护剂由以下重量份的原料组成：小球藻粉4.5份、银杏内酯B2.4份、生育酚乙酸酯0.5份、木糖醇6份；（3）冷冻干燥得到脐带间充质干细胞因子冻干粉。
[0019]实施例2一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，包括以下步骤：（1）制备脐带间充质干细胞因子浓缩液；A：取传代培养收获的P2代脐带间充质干细胞接种至培养基中，培养基包括DMEM/F12培养基和添加在培养基中的以下成分：L
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谷氨酰胺5μg/mL、胰岛素10μg/mL、右旋糖苷7.5μg/mL、L
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抗坏血酸20ng/mL，在5%O2，5%CO2，37℃条件下进行培养，当细胞融合度达到75%后收集培养上清液；
B：将收集的培养上清液先用0.22μm滤膜过滤，然后再用40KD的超滤膜进行透析，透析液再过50D的超滤膜，收集截留液即得脐带间充质干细胞因子浓缩液。
[0020]（2）向脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂混合均匀，每10mL脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂0.8g；保护剂由以下重量份的原料组成：小球藻粉3.5份、银杏内酯B1.7份、生育酚乙酸酯0.4份、木糖醇5份；（3）冷冻干燥得到脐带间充质干细胞因子冻干粉。
[0021]实施例3一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，包括以下步骤：（1）制备脐带间充质干细胞因子浓缩液；A：取传代培养收获的P5代脐带间充质干细胞接种至培养基中，培养基包括DMEM/F12培养基和添加在培养基中的以下成分：L
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谷氨酰胺10μg/mL、胰岛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备脐带间充质干细胞因子浓缩液；（2）向脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂混合均匀；所述保护剂包括以下重量份的原料：小球藻粉3.5
‑
5.5份、银杏内酯B1.7
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3.2份、生育酚乙酸酯0.4
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0.8份、木糖醇5
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8份；（3）冷冻干燥得到脐带间充质干细胞因子冻干粉。2.根据权利要求1所述脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述保护剂包括以下重量份的原料：小球藻粉4.5份、银杏内酯B2.4份、生育酚乙酸酯0.5份、木糖醇6份。3.根据权利要求1所述脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，每10mL脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂0.8
‑
1.4g。4.根据权利要求1所述脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，每10mL脐带间充质干细胞因子浓缩液中加入保护剂1.1g。5.根据权利要求1所述脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞因子浓缩液采用以下方法制备得到：A：取传代培养收集的脐带间充质干细胞接种至培养基中，在低氧条件下进行培养，当细胞融合度达到75
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【专利技术属性】
技术研发人员：张文博，黄马氏，
申请(专利权)人：张文博，
类型：发明
国别省市：