一种去膜活体鱼卵的批量制备方法技术

本发明专利技术公开了一种去膜活体鱼卵的批量制备方法，具体过程为：将不同发育阶段鱼卵置于蛋白酶K溶液中进行室温消化；用蒸馏水置换蛋白酶K溶液并于室温静置待用；用3D摆床振荡摇洗鱼卵直至鱼卵卵膜完全破碎脱落；吸去卵膜碎片，用蒸馏水清洗鱼卵后得到洁净、完整且仍保持活力的去膜鱼卵。本发明专利技术的去膜方法可以进行任意发育阶段鱼卵的批量去膜，省却繁琐耗时的手动剥膜步骤，简单省时，本发明专利技术得到的胚胎胚体完整、洁净且成活率高，便于开展整胚原位杂交或细胞学与发育学相关研究。交或细胞学与发育学相关研究。交或细胞学与发育学相关研究。

【技术实现步骤摘要】
一种去膜活体鱼卵的批量制备方法


[0001]本专利技术属于胚胎卵膜去除
，具体涉及一种去膜活体鱼卵的批量制备方法。

技术介绍

[0002]原位杂交技术是指在一定的温度和离子浓度下，以具有已知序列的核酸为探针与组织细胞内待测的核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。对于整胚原位杂交技术，去除胚胎外卵膜的同时保持胚体结构的完整性是该技术的重要关键环节。去除卵膜能够增强组织的通透性和核酸探针的穿透性，进而提高杂交信号；保持完整的胚体结构，如分裂球、眼囊、体节、尾芽、卵黄囊等结构，能够全面分析特定核酸在胚胎中分布的精确位置，进而达到预期实验效果。
[0003]硬骨鱼类卵膜是鱼卵最外端具有一定厚度的复杂多层蛋白质壳。自鱼卵排出母体受精直至孵化前胚胎成型关键阶段，卵膜和卵周液各自独立或相互结合组成统一屏障保护胚胎正常发育。卵膜可保护鱼卵，防止扭曲和变形；卵分泌物质可聚集在卵子周围增加保护作用，以免细菌、病毒的侵害；卵膜表面壁孔可供鱼卵营养物质吸收和代谢物排出，此外亦提供呼吸作用。当硬骨鱼类发育到特定阶段，胚胎必须从这种膜的包围本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种去膜活体鱼卵的批量制备方法，其特征在于具体过程为：步骤S1，蛋白酶K消化：将不同发育阶段鱼卵置于蛋白酶K溶液中进行室温消化；步骤S2，置换消化液：用蒸馏水置换蛋白酶K溶液并于室温静置待用；步骤S3，3D摆床摇洗去膜：用3D摆床振荡摇洗步骤S2中的鱼卵直至鱼卵卵膜完全破碎脱落；步骤S4，胚胎收集：吸去卵膜碎片，用蒸馏水清洗鱼卵后得到洁净、完整且仍保持活力的去膜鱼卵。2.根据权利要求1所述的去膜活体鱼卵的批量制备方法，其特征在于：步骤S1中所述蛋白酶K溶液浓度为10mg/mL，室温消化时间为3
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7min。3.根据权利要求1所述的去膜活体鱼卵的批量制备方法，其特征在于：步骤S2中室温静置时间为1
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2min。4.根据权利要求1所述的去膜活体鱼卵的批量制备方法，其特征在于：步骤S3中所述3D摆床振荡摇洗时间为3
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15min。5.根据权利要求1所述的去膜活体鱼卵的批量制备方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1，蛋白酶K消化：将不同发育阶段鱼卵吸入离心管中，去掉孵化水后用蒸馏水清洗干净，吸去蒸馏水，加入浓度为10mg/mL的蛋白酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：于淼，刚会会，刘传虎，王磊，乔志刚，江红霞，张猛，王方圆，李木子，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：