一种过表达LRRC15基因的质粒载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种过表达LRRC15基因的质粒载体及其制备方法和应用，涉及分子生物技术和基因工程领域。本发明专利技术提供了一种过表达LRRC15基因的质粒载体，通过在宿主细胞中转染该质粒载体，能够稳定有效地实现LRRC15基因的过表达，进一步影响细胞凋亡以及纤维化，能够应用于制备调空细胞凋亡和纤维化的药物中，为相关基应的预防和治疗提供了途径。相关基应的预防和治疗提供了途径。相关基应的预防和治疗提供了途径。

【技术实现步骤摘要】
一种过表达LRRC15基因的质粒载体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及分子生物技术和基因工程领域，具体而言，涉及一种过表达LRRC15基因的质粒载体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]细胞凋亡(apoptosis)指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
[0003]纤维化(fibrosis)是一个医学概念，纤维化可发生于多种器官，主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减少，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭，严重威胁人类健康和生命。
[0004]如何对细胞凋亡或纤维化进行调控或丰富调控手段对于多种疾病的治疗和新药开发具有重要意义。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种过表达LRRC15基因的质粒载体及其制备方法和应用。
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]第一方面，本专利技术实施例提供了过表达LRRC15基因的质粒载体在制备调控纤维化和/或纤维化相关基因的表达的药物中的应用。
[0009]第二方面，本专利技术实施例提供了过表达LRRC15基因的质粒载体在制备调控细胞凋亡和/或细胞凋亡相关基因的表达的药物中的应用。
[0010]第三方面，本专利技术实施例提供了一种过表达LRRC15基因的质粒载体，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0011]第四方面，本专利技术实施例提供了一种宿主细胞，其含有如前述实施例所述的过表达LRRC15基因的质粒载体。
[0012]第五方面，本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的宿主细胞的制备方法，其包括：将如前述实施例所述的宿主细胞导入宿主细胞中。
[0013]第六方面，本专利技术实施例提供了一种过表达LRRC15基因的质粒载体的制备方法，其包括：培养如前述实施例所述的宿主细胞。
[0014]第七方面，本专利技术实施例提供了一种药物，其包括有如前述实施例所述的过表达LRRC15基因的质粒载体或如前述实施例所述的宿主细胞。
[0015]本专利技术具有以下有益效果：
[0016]本专利技术提供了一种过表达LRRC15基因的质粒载体，通过在宿主细胞中转染该质粒载体，能够稳定有效地实现LRRC15基因的过表达，进一步影响细胞凋亡以及纤维化，能够应
用于制备调空细胞凋亡和纤维化的药物中，为相关基应的预防和治疗提供了途径。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0018]图1为本专利技术实验例提供的过表达LRRC15基因的质粒载体的酶切结果图；
[0019]图2为本专利技术实验例提供的质粒载体过表达LRRC15基因后，蛋白水平表达变化；
[0020]图3为本专利技术实验例提供质粒载体过表达LRRC15基因后，基因水平表达变化；
[0021]图4为本专利技术实验例提供质粒载体过表达LRRC15基因后对凋亡及其相关蛋白和基因水平的影响；
[0022]图5为本专利技术实验例提供质粒载体过表达LRRC15基因后对纤维化过程中EMT相关指标基因水平的影响。
具体实施方式
[0023]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0024]LRRC15基因全长为14495bp，含3个外显子，其外显子分别位于该基因的1
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83,6332
‑
6388,8698
‑
14495bp处，其mRNA全长为5938bp，共编码587个氨基酸。LRRC15(Leucine Rich Repeat Containing 15)，富含15个亮氨酸的重复序列，是LRRC超家族的成员之一。LRRC15蛋白是由六个结构域组成，主要包括：信号肽、特征性的富含亮氨酸重复序列(LRR)N端结构域、15个LRR、C端结构域、一个跨膜结构域和一个短细胞质结构域。
[0025]本专利技术实施例提供了过表达LRRC15基因的质粒载体在制备调控纤维化和/或纤维化相关基因的表达的药物中的应用。
[0026]在没有限定的情况下，只要将能够过表达LRRC15基因的质粒载体应用于制备调控纤维化和/或纤维化相关基因的表达的药物均属于本申请的保护范围中。
[0027]优选地，所述过表达LRRC15基因的质粒载体的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，该质粒载体包括pEGFP
‑
N1(XhoI/BamHI)荧光标签和酶切位点，相对于采用现有其他的过表达基因载体而言，SEQ ID No.1所示的质粒载体能够更加稳定有效地实现目的基因的过表达。
[0028]优选地，所述相关基因选自E
‑
cadherin和Vimentin中的任意一种。
[0029]优选地，调控纤维化相关基因的表达是指：降低E
‑
cadherin的表达水平和促进Vimentin基因的表达水平中的至少一种。
[0030]优选地，所述纤维化选自肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、脾纤维化、眼肌纤维化和骨髓纤维化中的至少一种，优选为肺纤维化。
[0031]本文中“基因的表达”可以指mRNA水平和/或蛋白的水平。
[0032]本专利技术实施例提供了过表达LRRC15基因的质粒载体在制备调控细胞凋亡和/或细
胞凋亡相关基因的表达的药物中的应用。
[0033]在没有限定的情况下，只要将能够过表达LRRC15基因的质粒载体应用于制备调控细胞凋亡和/或细胞凋亡相关基因的表达的药物均属于本申请的保护范围中。优选地，所述过表达LRRC15基因的质粒载体的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0034]优选地，所述细胞凋亡相关基因选自Bax、Bcl2和Caspase3中的至少一种。
[0035]优选地，调控细胞凋亡相关基因地表达是指：增强Caspase3基因的表达、增强Bax基因的表达水平和降低Bcl2基因的表达水平中的任意一种。
[0036]Caspase3基因(CASP 3)最初在人类Jurkat
‑
T淋巴细胞中被克隆出的，该基因编码一个32kDa的半胱氨酸蛋白酶CPP32，CPP32及其p20和p11重组体可以诱导sf9昆虫细胞发生凋亡。C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.过表达LRRC15基因的质粒载体在制备调控纤维化和/或纤维化相关基因的表达的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述过表达LRRC15基因的质粒载体的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；优选地，所述相关基因选自E
‑
cadherin和Vimentin中的任意一种；优选地，调控纤维化相关基因的表达是指：降低E
‑
cadherin的表达水平和促进Vimentin基因的表达水平中的至少一种；优选地，所述纤维化选自肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、脾纤维化、眼肌纤维化和骨髓纤维化中的至少一种。3.过表达LRRC15基因的质粒载体在制备调控细胞凋亡和/或细胞凋亡相关基因的表达的药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述过表达LRRC15基因的质粒载体的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；优选地，所述细胞凋亡相关基因选自Bax、Bcl2和Caspase3中的至少一种；优选地，调控细胞凋亡相关基因地表达是指：增强Caspase3基因的表达、增强Bax基因的表达水平和降低Bcl2基因的表达水平中的任意一种；优选地，所述调控细...

【专利技术属性】
技术研发人员：王棋文，韩棕远，孟令浩，温洪智，余国营，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：