一种提高水产动物组织观察效果的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高水产动物组织观察效果的方法，属于组织观察学领域。本发明专利技术将水产动物进行平衡和麻醉的前处理后获得的样品，再进行切片的制作，可有效减少因为水产动物自身的应激反应造成的组织结构变化，获得更加准确的水产动物组织结构的变化，可以获得结构清晰的组织切片，推动水产动物研究领域的科学发展。经过平衡、麻醉的前处理后获得的制得海参样品可直接用于制备冷冻切片，很大程度上节约了时间成本。本发明专利技术提供的方法操作简便、效果显著且成本低廉，便于推广。便于推广。便于推广。

【技术实现步骤摘要】
一种提高水产动物组织观察效果的方法


[0001]本专利技术涉及一种提高水产动物组织观察效果的方法，属于组织观察学领域。

技术介绍

[0002]海参和海胆都归属于棘皮动物门，海参高蛋白、低脂肪且富含人体必需的氨基酸、维生素、必需脂肪酸及常量和微量元素；海胆富含二十碳烯酸，其提取物波乃利宁有抑制癌细胞生长的作用。目前，海参的高营养价值得到越来越多人的认可，因此对其加工特性的研究日益增多。海参体壁主要由胶原组织构成，胶原组织间还有糖胺聚糖糖桥结构，在不同处理条件下这些结构的降解均会导致海参体壁组织结构的变化，对其质构特性、营养成分、感官品质等产生影响。准确的观察海参体壁组织结构的变化至关重要。
[0003]现阶段水产品微观结构的观察方法之一是光学显微镜观察，在进行显微镜观察之前需要进行切片样品的制作。切片染色技术是组织学研究领域的重要技术之一，主要包括冰冻切片、石蜡切片、碳蜡切片、超薄切片、塑料切片等。在对水产动物进行微观组织结构观察时多借助石蜡切片技术。石蜡切片技术因对设备要求不高且样品可长期保存等优点，在组织学和病理学常规制片技术中应用广泛，在水产品组织结构研究中也发挥着重要作用。在传统制作石蜡切片制备过程中，通常是在取样后直接将样品在10％二甲醛溶液中进行固定，然后进行一系列的脱水、透明、浸蜡、包埋、切片等步骤，此方法在对活体水产动物取样或处理过程中会使水产动物的肌纤维出现收缩再进行组装从而导致胶原纤维结构排列紊乱的现象，影响观察效果，难以获得准确理想清晰的组织结构。

技术实现思路

[0004]本专利技术主要是提供一种提高水产动物组织切片观察效果的方法，所述方法通过减少水产动物在制作切片过程中应激反应，能够很好的保持样品原有的微观组织结构，并将此方法应用到借助石蜡切片、冷冻切片、扫描电子显微镜观察水产动物组织结构。本专利技术的目的是为了更好的观察水产动物组织切片，提供一种能提高水产动物组织切片观察效果的样品制作方法，以获得水产动物组织结构更加准确的变化。
[0005]本专利技术提供了一种提高水产动物组织切片成像清晰度的方法，所述方法为在制备组织切片前对水产动物进行前处理，所述前处理为将新鲜水产动物分别经人工海水平衡液和海水麻醉液的处理。
[0006]在一种实施方式中，所述前处理为将新鲜水产动物分别经人工海水平衡液和海水麻醉液浸泡一定时间。
[0007]在一种实施方式中，所述前处理为将新鲜水产动物浸泡于人工海水平衡液中0.5～2.5h，再浸泡于海水麻醉液中0.5～2.5h。
[0008]在一种实施方式中，所述人工海水平衡液为2～5％氯化钠溶液。
[0009]在一种实施方式中，所述海水麻醉液为含有2～8％MgCl2的2～5％氯化钠溶液。
[0010]在一种实施方式中，所述海水麻醉液为冰水预冷的海水麻醉液。
[0011]在一种实施方式中，所述水产动物包括棘皮动物门。
[0012]在一种实施方式中，所述水产动物包括海参或海胆。
[0013]在一种实施方式中，所述组织切片包括石蜡切片、冰冻切片、碳蜡切片、超薄切片或塑料切片。
[0014]本专利技术还提供了一种提高水产动物组织切片成像清晰度的试剂盒，所述试剂盒包含人工海水平衡液和海水麻醉液，所述人工海水平衡液为一定浓度的氯化钠溶液，海水麻醉液为含有一定浓度氯化镁的氯化钠溶液。
[0015]在一种实施方式中，所述人工海水平衡液为2～5％氯化钠溶液。
[0016]在一种实施方式中，所述海水麻醉液为含有2～8％MgCl2的2～5％氯化钠溶液。
[0017]本专利技术还提供了所述方法或所述试剂盒在切片染色
中的应用。
[0018]本专利技术还提供了所述方法或所述试剂盒在水产动物组织学研究领域中的应用。
[0019]本专利技术的有益效果：
[0020]1、经过平衡、麻醉的前处理后获得的水产动物样品，再进行切片的制作，可有效减少因为水产动物自身的应激反应造成的组织结构变化，获得更加准确的海参组织结构的变化，可以获得结构清晰的组织切片，推动水产动物研究领域的科学发展。
[0021]2、经过平衡、麻醉的前处理后获得的制得海参样品可直接用于制备冷冻切片，对于海参体壁样品的胶原纤维不会造成破坏，可以清晰观察到有序排列的胶原纤维和蛋白聚糖，相比石蜡切片很大程度上节约了时间成本。本专利技术提供的方法操作简便、效果显著便于推广。
[0022]3、经过平衡、麻醉的前处理后获得的制得海胆样品制备得到的石蜡切片，可以观察到相比传统石蜡切片更加清晰的营养吞噬细胞所构成的网状结构和配子细胞。
附图说明
[0023]图1为光学显微镜观察海参体壁的石蜡切片；A图是未经过平衡和麻醉的新鲜海参的组织结构，B图为经过平衡和麻醉的新鲜海参的组织结构。
[0024]图2为光学显微镜观察冷冻切片；A图是未经过平衡和麻醉的新鲜海参的组织结构，B图为经过平衡和麻醉的新鲜海参的组织结构。
[0025]图3为利用扫描电镜观察新鲜海参体壁皮层中易变胶原组织(MCT)结构；A图是未经过平衡和麻醉的新鲜海参的组织结构，B图为经过平衡和麻醉的新鲜海参的组织结构。
[0026]图4为光学显微镜观察新鲜海胆性腺组织切片；A图是未经过平衡和麻醉的新鲜海胆性腺组织结构，B图为经过平衡和麻醉的新鲜海胆性腺组织结构。
具体实施方式
[0027]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0028]下述实施例中涉及到的实验材料：
[0029]Weigert铁苏木精购自北京雷根生物技术有限公司，货号：DC0045。VG染色液购自北京雷根生物技术有限公司，货号：DC0046。阿利新蓝染色液购自北京雷根生物技术有限公
司，货号：DG0007。过碘酸溶液购自北京宝希迪有限公司，货号：P815692
‑
25g。Schiff试剂购自Solabio，货号：G1286
‑
100 mL。
[0030]实施例1：制备石蜡切片
[0031]S1、取样并平衡：取新鲜海参浸泡在人工海水平衡液(3.5％氯化钠溶液)中平衡处理1h，得平衡后的海参活体；
[0032]S2、麻醉：将步骤S1所述的海参活体浸泡在冰温海水麻醉液(含有3.5％MgCl2的人工海水平衡液)里，进行麻醉处理1h，得麻醉后的海参活体；
[0033]S3、切块：取麻醉后的海参活体，沿腹部切开，去牙去内脏，清洗干净，将海参体壁腹部朝下，纵切去腹部，横切去头尾，将得到的海参背部平放，切成0.5cm x 0.5cm x 0.5cm的海参体壁样品块；
[0034]S4、固定：将海参体壁样品块浸泡在Bouin(饱和苦味酸的海水:40％甲醛溶液:冰醋酸＝15:5:1)固定液中固定24h，得到固定后海参体壁样品块；
[0035]S5、梯度脱水：将固本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高水产动物组织切片成像清晰度的方法，其特征在于，所述方法为在制备组织切片前对水产动物进行前处理，所述前处理为将新鲜水产动物分别经人工海水平衡液和海水麻醉液的处理。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前处理为将新鲜水产动物分别经人工海水平衡液和海水麻醉液浸泡一定时间。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述前处理为将新鲜水产动物浸泡于人工海水平衡液中0.5～2.5h，再浸泡于海水麻醉液中0.5～2.5h。4.根据权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，所述人工海水平衡液为2～5％氯化钠溶液，所述海水麻醉液为含有2～8％氯化镁的2～5％氯化钠溶液。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水产动物包括棘皮...

【专利技术属性】
技术研发人员：董秀萍，张娜娜，韦时彪，穆云奎，秦磊，姜鹏飞，王书晨，李子金，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：