靶向肺炎克雷伯菌MdtABC外排泵的sRNA及在制备四环素类抗生素耐药株中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向肺炎克雷伯菌MdtABC外排泵的sRNA及在制备四环素类抗生素耐药株中的应用。本发明专利技术通过对肺炎克雷伯菌替加环素诱导耐药株的生物信息学分析，筛选得到负调控MdtABC外排泵的sRNA—120sRNA。将肺炎克雷伯菌临床敏感株KPS改造为120sRNA敲除株KPS

【技术实现步骤摘要】
靶向肺炎克雷伯菌MdtABC外排泵的sRNA及在制备四环素类抗生素耐药株中的应用


[0001]本专利技术涉及一种small RNA及其应用，特别涉及一种靶向肺炎克雷伯菌 MdtABC外排泵的small RNA及其在制备四环素类抗生素肺炎克雷伯菌耐药菌株 中的应用。本专利技术属于医药


技术介绍

[0002]肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是肠杆菌科克雷伯菌属，革兰阴性菌。 存在于自然界和健康人体中，当机体免疫力下降或健康出现问题时，可引起多种 炎症，如肺炎、脑膜炎、尿路感染、血液感染及肝脓肿等侵袭性感染。
[0003]MdtABC外排泵属于革兰阴性菌与耐药相关的五大外排泵家族中耐药结节细 胞分裂家族(Resistance Nodulation
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cell Division superfamily，RND)，存在于细菌 内膜和外膜间隙，与多种抗生素、有害内源性代谢物和毒性外源化合物泵出有关， 其在肺炎克雷伯菌替加环素耐药株中一般呈现高表达并受到多种调节因子调节。/>[0004]sR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向肺炎克雷伯菌MdtABC外排泵的sRNA，其特征在于，所述的sRNA命名为120sRNA，是由SEQ ID NO.1所示的DNA序列经过转录后得到。2.权利要求1所述的靶向肺炎克雷伯菌MdtABC外排泵的sRNA在制备肺炎克雷伯菌四环素类抗生素耐药株中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的四环素类抗生素包括替加环素(tigecycline)、奥玛环素(omadacycline)以及依拉环素(eravacycline)。4.一种制备肺炎克雷伯菌四环素类抗生素耐药株的方法，其特征在于，包括将肺炎克雷伯菌敏感菌株的120sRNA进行敲除的步骤。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)120sRNA敲除质粒pK18mcbsacB
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120CmR的制备1)通过NCBI中primer
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blast功能设计4对sRNA上下游同源臂相关特异性引物，其中引物对120U1
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F/R、120D1
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F/R分别用于扩增sRNA上下游同源臂；引物对120U2
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F/R、120D2
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F/R分别扩增得到带有酶切位点和用于overlap PCR的sRNA上下游同源臂；上下游同源臂引物：120U1
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F：GGTAAGGTGGCCCAGGAG120U1
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R：GTGAGAAACAACTATTTTGCACAGC120D1
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F：GGGTCGGGATGCCAGTATTC120D1
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R：TCGGCAATCTGACTACACTGG带有酶切位点的引物：120U2
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F：GATAGCTACAGACTTAGCtattcccaagcttGGTAAGGTGGCCCAGGAG120U2
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R：GAATACTGGCATCCCGACCCGTGAGAAACAACTATTTTGCACAGCG120D2
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F：GCAAAATAGTTGTTTCTCACGGGTCGGGATGCC120D2
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R：TCAGCTGTCAGATGCgtaaccggaattcTCGGCAATCTGACTACACTGG2)以抗生素敏感的临床肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板，通过引物对120U1
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F/R、120D1
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F/R扩增得到sRNA上下游同源臂120U1、120D1；3)以sRNA上下游同源臂120U1、120D1为模板，通过引物对120U2
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F/R、120D2
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F/R扩增得到带有酶切位点和用于overlap PCR的sRN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈杨，熊乙霖，韩钰峭，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：