用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法技术

本发明专利技术提供了用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，包括：利用流式细胞分选技术，对荧光标记水平不均一的同一组微球，根据各微球所带荧光素水平的差异，进行限制性分选，分选出荧光标记水平均一、分布集中、离散度小的部分微球，和其他组别的、同样经过分选的荧光微球，组合成新的多重荧光编码微球进行检测。本发明专利技术的实际应用价值在于，在流式点阵仪及其它类似设备上采用多重荧光编码微球进行多个生物标志物同时检测时，预先通过在流式分选仪上对每一组微球进行荧光强度的进一步限制性分选，从而达到减少或避免相邻微球间因荧光标记水平有重叠，而引起的相邻微球间发生交叉反应的目的，提高多重指标检测的精准度。提高多重指标检测的精准度。提高多重指标检测的精准度。

【技术实现步骤摘要】
用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，具体涉及用于控制流式点阵仪中采用的多重荧光编码微球在检测时发生交叉反应的方法。

技术介绍

[0002]流式点阵仪中采用的荧光编码微球检测技术是一种根据两个反应物之间存在相互结合作用原理，将一种反应物包被到荧光编码微球表面，用于检测另一种与之有结合作用的反应物。在进行多组反应物相互作用的多指标研究中，通过对微球进行多重荧光素、不同荧光强度的组合标记，使得每一种微球有其区别于其他种类微球的、独有的荧光素种类和强度的组合特点，而获得独有的编码。不同编码微球可以包被不同反应物，组合成多重微球的检测试剂，用于多指标的检测。
[0003]流式点阵仪是运用多重荧光编码微球进行多指标同时检测，其核心的技术在于微球大小和颗粒度的均一性、以及每个微球标注荧光素的均一性。假如同一组编码微球中每个微球被标记上的荧光素量不相同，微球之间的均一性则不足，流式仪上可见微球群落分布不集中，会引起同一组编码微球中的不同微球个体的荧光强度的离散度比较高，从而导致其中离散在主群落周围的部分微球由于荧光素标记过高或过低的微球发生跨区域偏移现象，而落入邻近的荧光素编码的其他检测微球组中，引起交叉反应现象的发生。

技术实现思路

[0004]采用流式点阵仪进行多重荧光编码微球的多指标检测的技术核心在于微球大小和颗粒度的均一性、以及每组微球标注荧光素的均一性。然而，正如本专利申请实施例里采用的商品化微球实验中所发现的那样，在荧光微球制备过程中，因为微球大小不一，颗粒度不均，以及同组微球的荧光素标记不均等原因，当我们采用不同组别的微球，组合成多重荧光微球的检测试剂时，常常会因为某组微球的荧光信号的离散度较大，导致该组微球的荧光信号漂移到邻近组微球的荧光信号检测区域，从而引起荧光微球之间发生交叉反应的现象。
[0005]针对上述技术问题，本专利技术提供了用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法。通过对每一组荧光微球进行荧光强度的进一步限制性分选，从而达到减少或避免相邻微球间因荧光标记水平有重叠，而引起的相邻微球间发生交叉反应的目的，提高多重指标检测的精准度。
[0006]为了实现本专利技术的技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0007]用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，包括：利用流式细胞分选技术，对荧光标记水平不均一的同一组微球，根据各微球所带荧光素水平的差异，进行限制性分选，分选出荧光标记水平均一、荧光强度分布集中、离散度小的部分微球和其他组别的、同样经过分选的荧光微球，组合成新的多重荧光编码微球进行检测。
[0008]优选地，所述限制性分选包括根据微球在前向散射光FSC和/或侧向散射光SSC的分布数据进行分选。
[0009]更优选地，若出现微球在象限中分布不集中，部分微球离散于主群落四周的情况，则根据FSC数据，建立分选门，分选出群落中心区域集中的微球群落，而离散于群落周围的直径小于或者大于设定的标准尺寸的微球以及两个或多个微球粘连体则被不被选中。
[0010]更优选地，若出现微球在象限中分布不集中，部分微球离散于主群落四周的情况，则根据SSC数据分布，分选出集中于群落中心的颗粒密度和内部复杂程度一致的微球，而离散于群落周围的内部性质差异度大的微球则不被选中。
[0011]优选地，所述限制性分选还包括根据微球标记的荧光素的种类的不同，选择适合该波长的检测通道。
[0012]更优选地，根据微球在FSC/SSC通道，以及在不同荧光素对应的检测通道上的分布情况，综合考虑微球大小和颗粒度，以及荧光素标记的荧光强度相对均一和集中的趋势，按照所需目的微球的数量，选择微球群落中心附近的区域作为分选目标。
[0013]优选地，多重荧光标记的微球采取多种荧光素联合分选的方式，结合或不结合FSC/SSC的分选，最终选择性分选出荧光素、微球大小、微球颗粒性质比分选前更具均一性的一组微球，用于制备成多重微球的检测试剂来源。
[0014]优选地，还包括对限制性分选后得到的微球进行有效性检测，包括：
[0015]1)将分选出来的微球，混匀后，重新在流式点阵仪上检测；
[0016]2)观察被分选微球在其标记的一个或多个荧光素的检测通道上，不同微球荧光强度的分布情况，比对其分选前后在不同荧光通道的离散度，具体分析荧光信号限制性分选后的微球，是否有跨区域漂移至邻近微球的荧光信号区域，而导致与邻近微球的交叉反应。
[0017]本专利技术利用流式细胞分选技术，对荧光素标记量不均等(流式仪上显示微球群落分布不集中，主群落周围会零星分布着部分微球)的同一组微球，根据同组各微球所带荧光素水平的差异，进行限制性分选，分选出荧光标记水平均一的部分微球，和其他组别的、同样经过分选的荧光微球，组合成多重微球检测试剂。在对微球的不同荧光标记水平的限制性分选过程中，可根据荧光标记微球的大小和内部颗粒性质的均一性的实际情况，结合前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)的分选同时进行。
[0018]本专利技术的有益效果：
[0019]本专利技术是使用流式点阵仪对多重荧光标记微球进行多指标检测过程中，通过对每一组微球进行荧光强度的进一步限制性分选，从而达到减少或避免相邻微球间因荧光标记水平有重叠，而引起的相邻微球间发生交叉反应的目的，提高多重指标检测的精准度。
[0020]本专利技术提供的方法可用于流式点阵仪、Luminex、液相芯片仪、和其他类似检测平台进行的多指标同时检测过程中。
附图说明
[0021]图1显示本专利技术中流式点阵仪所用的双重荧光标记微球经流式细胞仪分选前后FSC/SSC以及双重荧光强度的集中和离散趋势。图中被圈定区域内的散点即为跨区域漂移的、落在其它组别荧光微球信号位置的微球，是引起交叉反应的主因。
[0022]图2显示本专利技术中流式点阵仪所用的双重荧光标记微球经流式细胞仪分选后有效
性验证结果。
具体实施方式
[0023]为了更清楚地说明本专利技术，下面结合实施例并对照附图对本专利技术作进一步详细说明。本领域技术人员应当理解，实施例仅用作举例说明性的目的，不应被解释为限于此实施例所描述的方法，而是应被解释为包括本文提供的实施方法、及由此而变得显而易见的任何和全部的变化。
[0024]本专利技术用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的具体操作方法如下：
[0025]1.利用PBS或其他缓冲溶液将同一编码的一组微球制备成单微球悬液(通过将微球悬液涡旋震荡10s后利用超声仪超声20s，使其分散成单个颗粒)，然后上机进行预实验。根据微球的数量，调整流速和样品浓度；若读取样本的速度超过2000个/秒，则对样本进行倍数稀释，同时降低流速，使目标微球通过样品室的浓度约为200个/秒。
[0026]2.分析该组微球在前向散射光FSC和侧向散射光SSC的分布数据，根据目标微球组在这两个参数上分布情况，决定是否有必要对FSC和SSC做本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，包括：利用流式细胞分选技术，对荧光标记水平不均一的同一组微球，根据各微球所带荧光素水平的差异，进行限制性分选，分选出荧光标记水平均一、荧光强度分布集中、离散度小的部分微球，和其他组别的、同样经过分选的荧光微球，组合成新的多重荧光编码微球进行检测。2.根据权利要求1所述的用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，其特征在于，所述限制性分选包括根据微球在前向散射光FSC和/或侧向散射光SSC的分布数据进行分选。3.根据权利要求2所述的用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，其特征在于，若出现微球在象限中分布不集中，部分微球离散于主群落四周的情况，则根据FSC数据，建立分选门，分选出群落中心区域集中的微球群落，而离散于群落周围的直径小于或者大于设定的标准尺寸的微球以及两个或多个微球粘连体则被不被选中。4.根据权利要求2所述的用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，其特征在于，若出现微球在象限中分布不集中，部分微球离散于主群落四周的情况，则根据SSC数据分布，分选出集中于群落中心的颗粒密度和内部复杂程度一致的微球，而离散于群落周围的内部性质差异度大的微球则不被选中。5.根据权利要求2所述的用于控制流式点阵仪检测中发生交叉反应的方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡俊超，
申请(专利权)人：苏州才博医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：