一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测橡胶树白粉菌遗传转化效率的方法，所述方法包括如下步骤：将重组丝状真菌接种至橡胶树古铜期叶片上进行培养后喷施潮霉素B进行筛选，取发病叶片连同菌丝用GUS染色液进行染色，被染成蓝色的菌丝所对应的重组丝状真菌即为转化成功的转化子。本发明专利技术提供了一种可用于转化橡胶树白粉菌等丝状真菌且可用于评估橡胶树白粉菌转化体系转化效率的重组质粒，此重组质粒携带由橡胶树白粉菌核糖体蛋白编码基因RP60启动子序列融合GUS基因序列的重组报告基因。使用此重组质粒转化橡胶树白粉菌时，可对转化后获得的转化子菌丝进行简单的GUS染色来判断报告基因是否转化成功，相比以往传统检测转化子的方法检测效率更高。率更高。率更高。

【技术实现步骤摘要】
一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法。

技术介绍

[0002]橡胶树白粉病是橡胶树上最重要的病害之一，引起橡胶树白粉病的病原菌为橡胶树白粉菌(Erysiphe quercicola)。橡胶树白粉菌能侵染幼叶、芽、花序和嫩枝等幼嫩部位，橡胶树白粉病发病严重时可以造成橡胶树二次落叶，严重时影响天然橡胶的产量。因此，橡胶树白粉病是早春橡胶树“两病一虫”防治的重点对象之一。由于对橡胶树白粉菌致病机理研究较少，橡胶树白粉病的防治比较落后。
[0003]建立橡胶树白粉菌遗传转化方法是研究橡胶树白粉菌致病机理的基础。由于橡胶树白粉菌为专性寄生真菌，不能在人工培养基上进行培养，给转化后的筛选和检测带来了极大的困难。目前，常通过核酸水平和蛋白水平检测丝状真菌遗传转化效率。其中，核酸水平主要通过先将携带目的基因的重组菌株进行扩大培养并提取基因组DNA，然后根据目的基因序列设计特异引物，接着对重组菌株基因组DNA进行PCR检测。根据扩大培养的菌株基因组是否含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组质粒，其特征在于所述重组质粒包含第一酶切位点、第二酶切位点、橡胶树白粉菌编码RP60基因启动子、GUS报告基因、编码终止子基因和抗性基因，其中：所述橡胶树白粉菌编码RP60基因启动子的序列位于GUS报告基因序列上游；所述编码终止子基因的序列位于GUS报告基因序列下游；所述第一酶切位点位于橡胶树白粉菌编码RP60基因启动子序列上游；所述第二酶切位点位于编码终止子基因序列下游。2.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于所述抗性基因为氨苄青霉素抗性基因和潮霉素抗性基因。3.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于所述第一酶切位点为EcoRI和HindIII，其中：EcoRI序列为5
‘‑
GAATTC
‑3’
；HindIII序列为5
‘‑
AAGCTT
‑3’
。4.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述第二酶切位点为BamHI，其中：BamHI序列为5
‘‑
GGATCC
‑3’
。5.一种用于评估橡胶树白粉菌转化体系转化效率的重组丝状真...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈代朋，李潇，缪卫国，刘文波，林春花，李志刚，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：