一种格氏乳杆菌复合制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种格氏乳杆菌复合制剂及其应用，属于微生物技术领域。为了提供一种含有格氏乳杆菌的复合制剂在治疗功能性便秘的中的应用，复合制剂的成分按照质量比为格氏乳杆菌：低聚果糖粉＝40:1

【技术实现步骤摘要】
一种格氏乳杆菌复合制剂及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体一种格氏乳杆菌复合制剂及其应用。

技术介绍

[0002]便秘是一种临床上比较常见的消化系统疾病，主要表现为排便次数少、无便意、粪便干 结、排便困难等症状。目前，美国及欧洲的便秘发病率高达14％～30％，且大多集中在老人、 妇女以及本身患有各种疾病的患者，随着人们生活水平的提高，工作压力增大，以及饮食习 惯的改变，我国便秘的发病率也逐渐增加。便秘的发生总是伴随肠道动力问题，如内患肿瘤 等疾病或肠道外压迫肠道或妊娠等原因，再如膳食纤维及水分吸收的较少，导致肠道敏感性 降低等都会造成肠内容物移动缓慢，引起便秘。由于便秘症状较为普通，所以极易容易被忽 略，但其带来的危害却不容小觑。治疗便秘的主要方法是缓解为主，提升肠道转运时间为辅， 最后消除便秘的病因。现阶段缓解便秘的措施包括一般生活治疗、药物治疗、生物反馈训练 和手术等。其中最为常见的就是药物治疗，包括西药、中药与微生物制剂。西药虽见效快， 但不仅副作用大易引起其他疾病，而且仅对部分患者有作用。中药副作用小，疗效好，但某 些药材如大黄常会引起后续性的便秘。微生物药剂具有良好的调节肠道微生态的作用，其可 抑制肠内病原菌生长并促进益生菌的生长从而促进代谢产物的生成，调节胃肠道神经递质的 作用，不易引起不良反应。相比较而言，微生物制剂的优点最突出，且是一种新型的、可不 断开发其潜力的缓解便秘的良药，目前，只利用益生菌缓解便秘的效果仍不够明显。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是为了提供一种含有格氏乳杆菌的复合制剂在治疗功能性便秘的中的应 用。
[0004]本专利技术提供了一种格氏乳杆菌复合制剂，所述复合制剂的成分按照质量比为格氏乳杆 菌：低聚果糖粉＝(40:1)
‑
(10:1)。
[0005]进一步地限定，所述格氏乳杆菌的含量为108cfu/mL。
[0006]进一步地限定，所述复合制剂以脱脂奶粉、海藻糖或蔗糖为保护剂。
[0007]上述的复合制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：
[0008](1)菌种活化：将格氏乳杆菌JM1接种至MRS液体培养基中培养，得到活化的格氏 乳杆菌JM1菌种；
[0009](2)制备生物制剂：将步骤(1)得到的活化后的格氏乳杆菌JM1菌种，进行离心， 取沉淀物，洗涤沉淀物，冷冻干燥都得到格氏乳杆菌JM1冻干粉；
[0010](3)将步骤(2)获得的格氏乳杆菌JM1冻干粉与低聚果糖粉混合，得到复合制剂。
[0011]进一步地限定，步骤(1)所述格氏乳杆菌JM1是以5mL/100mL的接种量接种到MRS 液体培养基中。
[0012]进一步地限定，骤(1)所述培养的条件为：在37℃下，培养18h。
37℃下，培养18h，4℃下5000g离心10min取沉淀，用无菌PBS洗涤3次后收集沉淀，预 冻2h后，放入冷冻干燥机中干燥12h得到格氏乳杆菌JM1菌粉，待冻干菌粉达108cfu/mL， 以冻干菌粉：低聚果糖粉＝40:1的比例加入低聚果糖粉制成复合粉，
‑
20℃保存。所述的保护 剂为13％无菌脱脂乳粉溶液。
[0034]实施例3.一种格氏乳杆菌JM1与低聚果糖复合高配粉
[0035](1)菌种活化
[0036]将格氏乳杆菌JM1以5mL/100mL的接种量接种至MRS液体培养基中，在37℃下，培 养18h，得到活化的格氏乳杆菌JM1菌种，连续活化2代。
[0037](2)制备生物制剂
[0038]将活化好的格氏乳杆菌JM1培养物按5mL/100mL的接种量接种至MRS培养基中，在 37℃下，培养18h，4℃下5000g离心10min取沉淀，用无菌PBS洗涤3次后收集沉淀，预 冻2h后，放入冷冻干燥机中干燥12h得到格氏乳杆菌JM1菌粉，待冻干菌粉达108cfu/mL， 以冻干菌粉：低聚果糖粉＝10:1的比例加入低聚果糖粉制成复合粉，
‑
20℃保存。所述的保护 剂为13％无菌脱脂乳粉溶液。
[0039]利用以下实验验证实验效果：
[0040]1.动物实验设计
[0041]将36只体质量在20g左右的C57BL/6J小鼠随机平均分6组，分别是空白组、便秘模 型组、L.gasseri JM1+低聚果糖低配实验组、L.gasseri JM1+低聚果糖中配实验组及L.gasseriJM1+低聚果糖高配实验组。所有小鼠均适应1周后开始建立便秘模型。模型组及三组实验 组在第2周时灌胃盐酸洛哌丁胺(3mg/kg)，空白组灌胃无菌蒸馏水400μl，所有小鼠均正 常喂饲料并自由摄食饮水。第3、4周灌菌组各组分别灌胃实例1制得的生物制剂400μL， 空白组及模型组灌胃无菌脱脂乳400μL，所有小鼠均正常喂饲料并自由摄食饮水。
[0042]2.检测指标及方法
[0043]2.1小鼠胃肠运动能力及粪便含水量的测定
[0044]收集第28天小鼠新鲜粪便并称重，准确称量各组新鲜小鼠粪便质量(m1/g)，置于80℃ 烘箱中烘干至恒质量(m2/g)，按以下公式计算各组小鼠粪便含水量。
[0045][0046]实验第29天，给空白组灌胃无菌蒸馏水400μL，模型组及实验组灌胃400μL盐酸洛哌 丁胺溶液(3mg/kg)，1h后，各组灌胃墨汁200μL，从灌胃墨汁开始，记录各组小鼠排首粒 黑便的时间。
[0047]待测完首粒黑便实验后，各组小鼠禁食不禁水16h。次日，向空白组、模型组、灌菌组 各组分别灌胃400μl墨汁，准确计时0.5h后脱颈椎处死小鼠，无菌条件下打开腹腔，剪取上 端自幽门，下端至盲肠，用灭菌的尺子测量小肠全长(L1)，再测量自幽门至墨汁前沿长度 (L2)按以下公式计算小肠推进率。
[0048][0049]2.2小鼠胃肠调节肽的测定
[0050]将收集到的小鼠血液静置2h，3000
×
g离心15min后获得血清，参照相应酶联试剂
盒 说明书进行实验，利用ELISAcala软件制定标准曲线，再根据标准曲线计算中血清中胃动 素(motilin，MTL)、酪酪肽(peptide tyrosine tyrosine，PYY)的浓度。
[0051]3.结果
[0052]3.1各组小鼠胃肠运动能力及粪便含水量的测定
[0053]各组小鼠的肠道的运动能力检测结果如附图2及图3所示。结果表明模型组小肠推进率 与空白组小肠推进率存在显著性差异(P<0.05)，说明造模成功。三组实验组比较，L.gasseriJM1+低聚果糖中配实验组的缓解效果最突出，几乎接近空白组，恢复正常，其相较于模型 组的小肠推进率显著提升55.8％。同时，该组降低排黑便时间29.89％(p<0.05)。粪便含水量 结果如图1所示，结果表明三组不同比例的复合粉中L.gasseri JM1+低聚果糖中配实验组的 效果与其他两组存在显本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种格氏乳杆菌复合制剂，其特征在于，所述复合制剂的成分按照质量比为格氏乳杆菌：低聚果糖粉＝(40:1)
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(10:1)。2.根据权利要求1所述的复合制剂，其特征在于，所述格氏乳杆菌的含量为108cfu/mL。3.根据权利要求1所述的复合制剂，其特征在于，所述复合制剂以脱脂奶粉、海藻糖或蔗糖为保护剂。4.权利要求1
‑
3任一项所述的复合制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：(1)菌种活化：将格氏乳杆菌JM1接种至MRS液体培养基中培养，得到活化的格氏乳杆菌JM1菌种；(2)制备生物制剂：将步骤(1)得到的活化后的格氏乳杆菌JM1菌种，进行离心，取沉淀物，洗涤沉淀物，冷冻干燥都得到格氏乳杆菌JM1冻干粉；(3)将步骤(2)获得的...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜毓君，满朝新，宗馨然，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：