一种提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法，将改造后的重组大肠杆菌于培养基中进行发酵；所述改造方法为采用以下任意一种或几种方式进行改造：A.弱化moaE基因、gshB基因、yceA基因、ychJ基因中的一个或几个基因的表达；B.强化bcsB基因、csgA基因、csgB基因、fimH基因中的一个或几个基因的表达。本发明专利技术所提供的方法提高了大肠杆菌分泌生产人表皮生长因子的能力，使得大肠杆菌在单批次游离发酵和固定化连续发酵中产人表皮生长因子的效率得到了1～2倍的提高，实现了人表皮生长因子的连续化生产。子的连续化生产。子的连续化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法


[0001]本专利技术属于基因工程技术和发酵工程领域，具体涉及到一种利用大肠杆菌提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法。

技术介绍

[0002]生物合成医药蛋白越来越受到人们的广泛关注，因为与化学合成相比，生物合成的安全性更高。大肠杆菌具有很多优势，如生长周期短、易于实现高密度培养、遗传背景明确以及外源基因转化速度快等，因此常用于表达重组蛋白。然而，实现重组蛋白的商业化生产仍然是一个挑战，最重要的问题之一是大肠杆菌分泌蛋白质的能力很差。在生产过程中包涵体的形成、蛋白降解、细胞代谢负担或表达蛋白的转运/运输系统效率低下等问题都会导致蛋白分泌效率低下。为了提高大肠杆菌的蛋白质分泌效率，人们尝试了很多方法，如选择高效的信号肽(如OmpA和PelB的信号序列)将蛋白质有引导至大肠杆菌蛋白分泌通路；对参与跨膜运输的关键转运蛋白或辅助蛋白进行修饰也被应用于提高蛋白质的分泌效率；此外，融合蛋白和分子伴侣的共表达也被证明可以增加蛋白质的表达和胞外分泌；其他改善蛋白质分泌的方法还包括优化发酵过程参数和培养基配方。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，对大肠杆菌采用以下任意一种或几种方式进行改造；A.弱化moaE基因、gshB基因、yceA基因、ychJ基因中的一个或几个基因的表达；B.强化bcsB基因、csgA基因、csgB基因、fimH基因中的一个或几个基因的表达；其中，所述moaE基因、gshB基因、yceA基因、ychJ基因、bcsB基因、csgA基因、csgB基因和fimH基因的核苷酸序列是分别是NCBI上的Gene ID:945399、Gene ID:947445、Gene ID:945601、Gene ID:945828、Gene ID:948045、Gene ID:949055、Gene ID:947391和Gene ID:948847所示的核苷酸序列。2.一种提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法，其特征在于，将权利要求1所述重组大肠杆菌于培养基中进行发酵，即得含人表皮生长因子的发酵液。3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述培养基含有胰蛋白胨5～15g/L，酵母粉提取物1～30g/L，氯化钠0～12g/L，葡萄糖0～50g/L，甘油0～10mL/L，磷酸氢二钾0～14.4g/L，磷酸二氢钾0～5g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：应汉杰，李梦婷，柳东，张冲，周淼，王振宇，庄伟，王志，刘金乐，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：