与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的分子标记及其在小豆抗豆象分子标记辅助育种中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的分子标记及其在小豆抗豆象分子标记辅助育种中的应用。本发明专利技术通过“饭豆F021

【技术实现步骤摘要】
与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的分子标记及其在小豆抗豆象分子标记辅助育种中的应用


[0001]本专利技术涉及一种饭豆抗豆象QTL位点，同时还涉及与该饭豆抗豆象QTL位点连锁的分子标记，以及该QTL位点及分子标记在小豆抗豆象分子标记辅助育种中的应用。本专利技术属于分子标记辅助育种


技术介绍

[0002]豆象是危害小豆、绿豆、豇豆等食用豆类作物的主要仓储害虫。受豆象危害后，食用豆表面出现孔洞，重量降低，营养丧失，质量严重下降。目前，生产上防治豆象危害的方法主要为磷化铝熏蒸法。这不仅增加了食用豆生产的成本，而且磷化铝如果使用不当，容易造成环境污染、导致人畜中毒。防治豆象危害最为经济且环保的方法是培育抗豆象食用豆品种。
[0003]小豆中缺少抗豆象资源。到目前为止，已有的报道中还未从小豆或其野生种材料中发现抗豆象材料。现有的小豆抗豆象研究是基于小豆的近缘野生种Vigna nepalensis。Somta等利用Vigna nepalensis与小豆进行杂交，构建遗传分离群体，对其抗豆象基因位点进行了定位，然而在他们发现的抗豆象QTL位点中，大部分位点与籽粒大小紧密连锁，后代材料在表现抗豆象的同时往往籽粒较小，这就不利于用其培育抗豆象且籽粒较大、商品性较好的小豆品种。
[0004]大部分饭豆资源对豆象有抗性，且作为栽培种，其籽粒较大，在育种应用中可以较少的引入不利性状。前期，我们已经通过幼胚拯救的手段实现了小豆与饭豆间的远缘杂交。这就为培育抗豆象小豆种质或品种提供了条件。在回交过程中我们发现，若不对抗豆象表型进行紧密追踪，回交后代材料中很容易丢失抗豆象特性。因此需要对抗豆象基因进行定位，以进行分子标记辅助选择，实现对抗豆象表型的标记跟踪。
[0005]本专利技术利用河北省农林科学院粮油作物研究所保存的抗豆象饭豆资源饭豆F021，通过利用远缘杂交和幼胚拯救构建了遗传研究群体，结合室内抗豆象鉴定，利用多态性SSR标记构建遗传连锁图谱定位饭豆抗豆象基因，为今后小豆和饭豆抗豆象分子标记辅助育种及抗豆象基因精细定位奠定基础。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种与抗豆象相关的QTL位点以及与该QTL位点紧密连锁的分子标记及其在小豆抗豆象育种中的应用。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：
[0008]本专利技术筛选饭豆抗豆象QTL位点及SSR分子标记的方法如下：
[0009]S1:以抗豆象饭豆F021作母本，以感豆象亲本白红2号作父本进行杂交，经过幼胚拯救，获得F1；F1连续自交，采用单粒传法构建F8代RIL群体，该RIL群体包括178个单株材料；
[0010]S2:RIL群体每个株系分别接种绿豆象成虫，即为2个处理，每个处理设置3次重复；
以抗豆象亲本饭豆F021和感豆象亲本白红2号作为对照，进行抗豆象鉴定，设置养虫室温为29
‑
31℃，湿度55％
‑
65％。当感豆象亲本白红2号全部籽粒被蛀食开始调查，观察记录各组籽粒材料的被害粒数，计算平均被害率；
[0011]S3:采集抗豆象亲本饭豆F021、感豆象亲本白红2号和RIL群体各株系幼嫩的三出复叶，采用改良的CTAB法提取DNA。以亲本DNA为模板、利用3072个不同来源SSR标记筛选多态性SSR标记；
[0012]S4:根据上述电泳结果，筛选出264个在饭豆F021和白红2号之间扩增条带稳定、清晰、差异显著的多态性SSR标记；
[0013]S5:利用Joinmap 4.0作图软件对264个多态性标记和178个RIL株系基因型分型结果进行遗传连锁分析，以LOD值作为标记分组依据，构建了一张包含182个标记、11个连锁群的遗传连锁图谱；
[0014]S6：利用MapQTL6复合区间作图法，结合178个RIL群体株系抗豆象表型鉴定结果和分子标记分型结果进行QTL定位分析，检测得到一个与抗豆象相关的QTL位点。同时，还筛选得到与该QTL位点连锁的两个SSR分子标记为Achr7
‑
43和Achr7
‑
71。
[0015]本专利技术的一种与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记，所述饭豆抗豆象QTL位点命名为UmBr1，位于第2连锁群的Achr7
‑
43～Achr7
‑
71标记区间内，对应于小豆第7号染色体，与UmBr1位点连锁的两个SSR分子标记为Achr7
‑
43和Achr7
‑
71，所述的SSR分子标记Achr7
‑
43为Achr7
‑
43F引物和Achr7
‑
43R引物扩增的片段，所述的SSR分子标记Achr7
‑
71为Achr7
‑
71F引物和Achr7
‑
71R引物扩增的片段，Achr7
‑
43F引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Achr7
‑
43R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；Achr7
‑
71F引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Achr7
‑
71R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0016]其中，所述的饭豆抗豆象QTL位点的遗传距离为0.7cM，可解释中12.3％的表型变异，加性效应为
‑
0.165。
[0017]进一步的，本专利技术还提出了所述的与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记在小豆抗豆象分子标记辅助选择育种中的应用。
[0018]再进一步的，本专利技术还提出了一种用于扩增与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记的引物对，所述的SSR分子标记为Achr7
‑
43和Achr7
‑
71，用于扩增SSR分子标记Achr7
‑
43的引物对由上游引物Achr7
‑
43F和下游引物Achr7
‑
43R组成，用于扩增SSR分子标记Achr7
‑
71的引物对由上游引物Achr7
‑
71F和下游引物Achr7
‑
71R组成；Achr7
‑
43F引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Achr7
‑
43R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；Achr7
‑
71F引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Achr7
‑
71R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0019]再进一步的，本专利技术还提出了所述的引物对在小豆抗豆象分子标记辅助选择育种中的应用。
[0020]其中，优选的，分别通过Achr7
‑
43F引物和Achr7
‑
43R引物及/或Achr7
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记，所述饭豆抗豆象QTL位点命名为UmBr1，位于第2连锁群的Achr7
‑
43～Achr7
‑
71标记区间内，对应于小豆第7号染色体，与UmBr1位点连锁的两个SSR分子标记为Achr7
‑
43和Achr7
‑
71，所述的SSR分子标记Achr7
‑
43为Achr7
‑
43F引物和Achr7
‑
43R引物扩增的片段，所述的SSR分子标记Achr7
‑
71为Achr7
‑
71F引物和Achr7
‑
71R引物扩增的片段，Achr7
‑
43F引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Achr7
‑
43R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；Achr7
‑
71F引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Achr7
‑
71R引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。2.如权利要求1所述的SSR分子标记，其特征在于，所述的饭豆抗豆象QTL位点的遗传距离为0.7cM，可解释中12.3％的表型变异，加性效应为
‑
0.165。3.权利要求1所述的与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记在小豆抗豆象分子标记辅助选择育种中的应用。4.一种用于扩增与饭豆抗豆象QTL位点紧密连锁的SSR分子标记的引物对，其特征在于，所述的SSR分子标记为Achr7
‑
43和Achr7
‑
71，用于扩增SSR...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘长友，田静，范保杰，曹志敏，胡阿丽，黄冀楠，苏秋竹，王彦，张志肖，王珅，时会影，沈颖超，
申请(专利权)人：河北省农林科学院粮油作物研究所，
类型：发明
国别省市：