一株马胃葡萄球菌及其在防治果蔬灰霉病上的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株马胃葡萄球菌菌株及其应用，该菌株其被命名为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1，该菌株于2021年1月18日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC No.21658，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该马胃葡萄球菌F1对果蔬灰霉病菌具有高效抑菌效果，可显著抑制灰霉病菌菌丝的生长以及孢子的萌发，可应用于制备生防菌剂和果蔬保鲜剂，且该菌株的抑菌谱较广，具有防治效果稳定，对环境友好等特点，适合大规模生产，生产成本低。产成本低。产成本低。

【技术实现步骤摘要】
一株马胃葡萄球菌及其在防治果蔬灰霉病上的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别涉及一株马胃葡萄球菌及其在防治果蔬灰霉病上的应用。

技术介绍

[0002]由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是果蔬采后贮藏期间的重要病害之一，该病在果蔬运输、贮藏等各个环节均可发生，每年造成严重的经济损失。果蔬感染灰霉病后，在发病部位形成圆形或近圆形的水渍状软腐病斑，后期病斑上产生鼠灰色霉状物和分生孢子。由于该病原菌具有很强的耐低温能力，即使在冷藏条件下也可导致果蔬腐烂，且存在接触传染。有效控制灰霉病对于提高果蔬采后贮藏保鲜具有重要意义。
[0003]目前，防治果蔬采后灰霉病的传统方法主要是依赖化学杀菌剂发，但化学杀菌剂的药剂残留、病原菌易对其产生抗性和环境污染严重等问题已日趋严重，多种化学杀菌剂已被限制或禁止使用。因此，寻求可替代化学杀菌剂的安全有效防治措施已成为苹果采后贮藏中亟待解决的问题。大量研究表明，生物防治因其高效和无污染的特点，是解决农业可持续发展的有效途径，有的生防制剂已在生产中得到应用。
[0004]采用生防菌剂防治果蔬灰霉病对环境友好，可以避免化学防治带来的一系列问题。生防菌剂可减少或替代化学药剂的使用，从而达到防治果蔬灰霉病的目的。
[0005]然而，现有已发现的可用于制备防治果蔬灰霉病的生防菌剂的生物菌株少，缺少对应的有效的生防菌剂，因此，如何解决上述技术问题，是目前微生物
需要解决的技术问题。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供一株马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1及其在防治果蔬灰霉病上的应用，马胃葡萄球菌F1对果蔬灰霉病菌具有高效抑菌效果，且抑菌谱较广，可广泛应用于果蔬灰霉病菌的防治，具有防治效果稳定，对环境友好的优点。
[0007]本专利技术的技术方案具体如下：
[0008]第一方面，本专利技术提供一株马胃葡萄球菌，其被命名为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1。该菌株于2021年1月18日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC No.21658，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0009]第二方面，本专利技术还提供一种采用上述马胃葡萄球菌制备的生防菌剂，该生防菌剂是马胃葡萄球菌F1的菌体、菌悬液、发酵滤液或其活性提取物。
[0010]第三方面，本专利技术提供前述马胃葡萄球菌或前述生防菌剂在防治果蔬病害上的应用；优选地，所述果蔬病害包括果蔬灰霉病。果蔬包括各种可被果蔬侵染的水果以及蔬菜。后续具体实施例中以番茄、葡萄和苹果为例进行实验。
[0011]优选地，所述马胃葡萄球菌用于抑制灰霉病菌菌丝生长及孢子萌发。
[0012]第四方面，本专利技术还提供一种前述生防菌剂的制备方法，其包括以下步骤：
[0013]S1、将前述马胃葡萄球菌F1划线接种在固体培养基中，活化培养得到活化的单菌落；
[0014]S2、将活化的马胃葡萄球菌F1单菌落接种于液体培养基中，震荡培养得到发酵种子液；
[0015]S3、将发酵种子液接种到液体培养基中扩大培养，得到马胃葡萄球菌F1的细胞培养液；
[0016]S4、将上述细胞培养液进行离心分离得到菌体沉淀后，用无菌水是菌体沉淀重新悬浮，得到的马胃葡萄球菌F1的菌悬液，即生防菌剂。
[0017]优选地，所述固体培养基为PDA培养基，所述液体培养基为PDB培养基。
[0018]优选地，S1步的培养条件为28℃恒温活化培养24h。
[0019]优选地，S2步的培养条件为:将活化的菌株F1单菌落接种于装瓶量80mL/250mL的PDB培养基中，180r
·
min
‑1，28℃恒温震荡培养48h。
[0020]优选地，S3步的培养条件为:将发酵种子液按1:100的接种量，接种到PDB培养基中扩大培养，28℃恒温震荡培养48h，得到109cfu
·
mL
‑1的F1菌株的细胞培养液。
[0021]优选地，S4步的培养条件为:109cfu
·
mL
‑1F1菌株的细胞培养液c，在4℃条件下，12000r
·
min
‑1离心15min后，收集F1菌体沉淀用无菌水重新悬浮，得到109cfu
·
mL
‑1的F1菌悬液。
[0022]第五方面，本专利技术还提供一种果蔬保鲜剂，其有效成分为前述的马胃葡萄球菌。优选地，所述果蔬保鲜剂直接采用前述的马胃葡萄球菌F1的菌液或菌体重悬液或菌体发酵上清液，或者以此为活性成分，添加辅料，制成不同的剂型。
[0023]经过实验证明，经过本专利技术的马胃葡萄球菌F1菌液浸泡处理后，可有效抑制因果蔬灰霉病导致的病斑。因此，该菌株可用于制备果蔬保鲜剂，利用含该菌的菌液的保鲜剂对待处理的果蔬进行浸泡处理或喷洒处理后，再进行储存或运输，可有效延长其保鲜时间，避免果蔬因感染灰霉病而快速腐烂。
[0024]第六方面，本专利技术还提供一种果蔬保鲜方法，该方法为：将果蔬浸泡在所述果蔬保鲜剂中，或者将前述果蔬保鲜剂向果蔬表面进行喷洒。
[0025]优选地，所述果蔬保鲜方法中，所述果蔬为番茄、葡萄、苹果。
[0026]有益效果
[0027]1、本专利技术首次分离出一株马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)菌株F1，其对果蔬灰霉病具有显著的防治效果，实施例的研究表明，菌株F1可显著抑制灰霉病菌菌丝的生长以及孢子的萌发；此外，菌株F1的抑菌谱较广，除果蔬灰霉病菌外，还对苹果树腐烂病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽叶枯病菌等多种植物病原菌都具有优异的拮抗作用，可同时用于防治多种植物病害。
[0028]2、本专利技术菌株F1菌悬液对果蔬灰霉病的防治效果优异，都在81％以上，其中对苹果灰霉病的防治效果高达93.51％；菌株F1能够诱导植物组织内御相关酶活性增加，提高抗病基因表达水平；本专利技术生防菌剂具有防治效果稳定，对环境友好等特点，适合进行大规模生产，发酵工艺简单，生产成本低廉，具有很好的市场前景。
[0029]3、基于菌株F1对灰霉病菌的优异防治效果，该菌株可用于制备果蔬保鲜剂，利用
含该菌的菌液的保鲜剂对待处理的果蔬进行浸泡处理或喷洒处理后，再进行储存或运输，可有效延长其保鲜时间，避免果蔬因感染灰霉病而快速腐烂。
附图说明
[0030]图1为菌株F1在LB培养基上的菌落形态；
[0031]图2为菌株F1提取DNA的16S rDNA序列PCR扩增示意图；
[0032]其中，图中M为核酸Marker DL2000；图中1为菌株F1基因组DNA的16SrDNA序列扩增结果；
[0033]图3为菌株F1对果蔬灰霉病菌菌丝生长(a)和孢子萌发(b)的影响；
[0034]其中，图中A为菌株F1对灰霉病菌菌丝生长的影响本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株马胃葡萄球菌，其特征在于，被命名为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1，其保藏号为CGMCC No.21658。2.一种利用如权利要求1所述的马胃葡萄球菌制备的生防菌剂，其特征在于：所述生防菌剂是马胃葡萄球菌F1的菌体、菌悬液、发酵滤液或其活性提取物。3.如权利要求1所述的马胃葡萄球菌或如权利要求2所述的生防菌剂在防治果蔬灰霉病上的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的马胃葡萄球菌在抑制灰霉病菌菌丝生长和灰霉病菌孢子萌发上的应用。5.一种如权利要求2所述的生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将权利要求1所述的马胃葡萄球菌F1划线接种在固体培养基中，活化培养得到活...

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩霞，郝柏慧，赵润欣，孙子豪，李保华，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：