一种外周血淋巴细胞培养基制造技术

本发明专利技术涉及外周血淋巴细胞的增殖培养领域，具体来说是一种外周血淋巴细胞培养基，培养基包含：10

【技术实现步骤摘要】
1640，1
‑
3g/L的碳酸氢钠，10
‑
15mg/L的植物血凝素，体积比为15％
‑
25％的胎牛血清，0.1
‑
0.5g/L的庆大和两性霉素，20
‑
50mg/L的肝素钠，pH值为7.2
±
0.2。
[0012]2.采血：采血0.5mL至培养管中，颠倒混匀5次。
[0013]3.培养：将培养管水平放置在培养箱内，37℃恒温培养72小时。
[0014]实施例2：(采用小牛血清)
[0015]1.配置培养基：在培养管中按照以下比例配置培养基，10
‑
20g/L的RPMI Medium 1640，1
‑
3g/L的碳酸氢钠，10
‑
15mg/L的植物血凝素，体积比为15％
‑
25％的小牛血清，0.1
‑
0.5g/L的庆大和两性霉素，20
‑
50mg/L的肝素钠，pH值为7.2
±
0.2。
[0016]2.采血：采血0.5ml至培养管中，颠倒混匀5次。
[0017]3.培养：将培养管水平放置在培养箱内，37度恒温培养72小时。
[0018]通过以下步骤分别得到两种不同培养基培养后的淋巴细胞的转换率和细胞分裂指数。
[0019]1.加秋水仙素：向培养72小时后的培养基内加秋水仙素，使用浓度为0.02
‑
0.05μg/mL。
[0020]2.继续培养1小时～2小时。
[0021]3.低渗处理：离心力200g，离心时间10分钟，吸出上清液5mL；加入预温至37℃的0.075M氯化钾低渗溶液5mL，振荡混匀1分钟，保温10分钟。
[0022]4.预固定：离心200g，10分钟，吸出上清液5mL。加入新鲜配制并预冷至2～8℃的卡诺氏固定液0.5mL预固定，静置10分钟，然后再加入固定液1mL混合后静置5分钟。
[0023]5.固定：半固定结束后，离心200g，5分钟。吸取上清液，管内保留0.5mL液体，然后加入5mL固定液，振荡混匀后静置5分钟。
[0024]6.再固定：200g离心力，5分钟，吸取上清液5mL，管内保留约0.5mL细胞沉淀物。
[0025]7.收获：加入0.5mL固定液，振荡混匀。此细胞沉淀物计约1mL即为收获的淋巴细胞染色体。
[0026]8.滴片：将免洗载玻片2
‑
8℃预冷，吸取上述细胞沉淀物50μL滴片。
[0027]9.热固定：将滴片以后的载玻片60～80度固定2
‑
5分钟。
[0028]10.胰酶处理：使用0.025～0.1％乙二胺四乙酸
‑
胰蛋白酶溶液处理30秒左右。
[0029]11.染色：用2～5％姬姆萨染色液染色5～7分钟，用纯化水冲去多余的染色液，冷风吹干载玻片即可。
[0030]淋巴细胞转换率的检测与计算方法：转变换率＝淋巴细胞转换数/1000*100％。即每1000个细胞中转换为淋巴母细胞的百分数。
[0031]淋巴细胞分裂指数检测与计算方法：分裂指数＝分裂细胞书/(1000
‑
分裂细胞数)*100％。即每1000个细胞中的分裂细胞数比上为分裂细胞数的百分数。
[0032]检测结果：
[0033][0034][0035]用小牛血清容易出现溶血现象，胎牛血清可以有效避免溶血现象，而且胎牛血清培养后的淋巴细胞转换率更高，分裂指数液更高。
[0036]以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种外周血淋巴细胞培养基,其特征在于，培养基包含：10
‑
20g/L的RPMI Medium 1640，1
‑
3g/L的碳酸氢钠，10
‑
15mg/L的植物血凝素，...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱德新，张献新，安淑英，吴迪，
申请(专利权)人：力因精准医疗产品上海有限公司，
类型：发明
国别省市：