一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法技术

本发明专利技术公开了一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法，具体步骤包括：材料准备、成熟胚预处理消毒、胚性愈伤组织的诱导和愈伤组织的增殖。本发明专利技术以睡莲成熟胚为外植体，取材方便，经消毒处理后污染率低，愈伤组织诱导率高，增殖效果好，可用于遗传转化、种质资源保存与快繁生产，为睡莲再生体系、转基因研究建立基础。础。础。

【技术实现步骤摘要】
一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法


[0001]本专利技术涉及一种植物组织培养技术，特别涉及一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法。

技术介绍

[0002]睡莲（Nymphaea）是睡莲科(Nymphaeaceae)睡莲属(Nymphaea)的多年生浮叶型水生草本植物，主要分布在温带及热带，其茎叶对水中富营养物和有害物质具有强吸附能力被广泛应用于园林水景中（廖卫伟，2016），市场需求广阔。目前睡莲品种中绝大多数还是通过人工杂交和自然杂交的手段结果的，育种周期长，随机性较强（李淑娟，2019），通过组织培养的方式生产种苗,生产速度快、可缩短繁育周期,有效保持种苗的优良性状并可以保存珍稀的睡莲种质资源，因此通过组织培养快速繁殖是目前尽快满足应用需求的有效途径，建立睡莲的无菌体系、离体再生体系迫在眉睫。
[0003]睡莲从淤泥水中长出，内生菌多，极易污染，离体培养过程中外植体灭菌和内生菌抑制的难度都较其它植物高，灭菌时间过短，会全部污染；灭菌时间过长则全部死亡（吴丽爽，2008），无菌材料的获得成为睡莲离体再生体系建立的技术瓶颈，这一技本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）成熟胚预处理：取睡莲成熟胚置于流水下冲洗干净，再在多菌灵溶液中消毒后用蒸馏水冲洗至无多菌灵残余；（2）诱导培养基准备：准备愈伤组织诱导培养基；（3）成熟胚的消毒处理：（a）将没有多菌灵残余的成熟胚装在离心管中，转移到超净工作台中；（b）在超净工作台中对成熟胚进行消毒灭菌，先使用75%酒精消毒处理1
±
0.1min，消毒后用无菌水冲洗至无酒精残余，接着用10%次氯酸钠消毒10
±
0.5min，消毒后用无菌水冲洗至无次氯酸钠残余，处理后的成熟胚晾干；（c）将成熟胚坚硬种皮剥掉，取出成熟胚置于离心管中；（d）在超净工作台中，将去种皮成熟胚先用75%酒精消毒30
±
3s，消毒后用无菌水冲洗至无酒精残余，接着用3%次氯酸钠消毒3
±
0.3min，消毒后用无菌水冲洗至无次氯酸钠残余，将处理后的去种皮成熟胚晾干后接入愈伤组织诱导培养基中，置于26
±
1℃条件下黑暗培养20
‑
30天；（4）准备愈伤继代培养基，其成分同步骤（2），将成熟胚从诱导培养基中转接入继代培养基，直到形成颗粒明显的愈伤组织；（5）准备愈伤增殖培养基；（6）增殖培养：待步骤（4）的愈伤组织直径长到4~8mm时，将其转移至愈伤增殖培养基中去，继续黑暗培养，从而获得大量胚性愈伤组织；其中，所述睡莲为耐寒睡莲。2.如权利要求1所述的一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，选择饱满健康的睡莲成熟胚，将流水冲洗后的睡莲成熟胚放在10g/L多菌灵溶液中常温涡旋振荡消毒20
±
5min，用蒸馏水冲洗至多菌灵无残余。3.如权利要求1或2所述的一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，愈伤组织诱导培养基经配制得到，所述愈伤组织诱导培养基成分为：1/2MS + 1.5~2.5 mg/L 2,4
‑
D + 0.2~0.5 mg/L TDZ + 50g/L蔗糖 + 8g/L琼脂。4.如权利要求3所述的一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐迎春，赵莹，姜慧，杨志娟，金奇江，王彦杰，周平，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：