病毒复制抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种病毒复制抑制剂及其应用，属于分子免疫学和病毒学技术领域。本发明专利技术首次研究发现血清淀粉样蛋白A可以作为病毒复制抑制剂，能直接地、显著地抑制MDV复制，收取病毒时与对照组相比病毒载量降低了3倍以上，并且对细胞无毒副作用。本发明专利技术的血清淀粉样蛋白A可作为抗MD药物广泛用于家禽业防御MDV的生产实践中，具有重大的经济价值及研究意义。具有重大的经济价值及研究意义。具有重大的经济价值及研究意义。

【技术实现步骤摘要】
病毒复制抑制剂及其应用


[0001]本专利技术涉及分子免疫学和病毒学
，具体涉及一种病毒复制抑制剂及其应用。

技术介绍

[0002]马立克氏病(Marek
’
s Disease，MD)是由马立克氏病病毒(Marek
’
s Disease Virus，MDV)引起的一种鸡的恶性淋巴肿瘤性疾病，同时还能引起被感染鸡只的免疫抑制。1907年匈牙利病理学家Jozef Marek首先发现了因单核细胞浸润于外周神经及脊柱神经根下而导致公鸡的坐骨神经肿大和瘫痪。1961年，在英国科学家Biggs的倡议下，开始使用马立克氏病这一名称。1967年，英国学者分离获得马立克氏病病毒。上世纪70年代以来，尽管家禽养殖广泛使用了各种MDV疫苗。但在全世界范围内本病仍是养禽业健康发展的主要危胁。1984年，仅美国因MDV直接死亡和养殖业主放弃的病鸡损失达1200万美元，若加上疫苗及其接种的费用和产蛋量的下降，损失就高达1.69亿美元，全世界因马立克氏病的损失高达9.43亿美元。随着各类MDV疫苗制剂的广泛使用，马立克氏病毒出现了野毒株与疫苗株重组，疫苗株毒力增强，随之频频出现MDV疫苗失败，感染受污染的疫苗株及新型野毒株的鸡群生产性能严重下降问题日益凸显。疫苗无法对新型MDV产生保护性等诸多问题，马立克氏病的防控出现了严峻的挑战。生产中对预防MDV感染并降低MDV对鸡群生产性能影响的生物制剂需求迫切。
[0003]先天免疫反应是宿主抵抗病原微生物入侵的首要屏障，当病原微生物入侵机体的时候，其所包含的物理屏障，急性反应期蛋白，特异性免疫反应会依次发挥作用抵抗病原微生物入侵。当病原微生物侵入时，许多急性反应期蛋白都会迅速大量升高并发挥各种直接或间接的抗病毒作用，例如直接与病毒结合抑制病毒附着或复制，增强宿主机体免疫能力，创造不利于病原微生物生存的为生态环境等来增强机体的抗病能力。同时，先天免疫蛋白是宿主本身产生的，宿主不会对其产生较强的排异反应，先天免疫蛋白在抗病毒领域有着巨大的开发应用前景。
[0004]研发预防和抑制MDV感染，降低MDV对生产性能造成影响的先天免疫蛋白，对于MD的防控有着重要而紧迫的现实意义。

技术实现思路

[0005]针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种病毒复制抑制剂及其应用。本专利技术发现，血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A，SAA)可以作为病毒复制抑制剂，能直接、显著的抑制MDV复制，且对细胞无毒副作用；可开发成MDV的治疗药物，具有广阔的应用前景。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面，提供血清淀粉样蛋白A在如下(1)或(2)中的应用：
[0008](1)制备预防和/或治疗马立克氏病病毒所致疾病的药物；
[0009](2)制备抑制马立克氏病病毒复制的药物；
[0010]所述血清淀粉样蛋白A是如下任一所示的蛋白质：
[0011]A1)氨基酸序列为SEQ ID NO.1的蛋白质；
[0012]A2)在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白。
[0013]其中，A1)和A2)所述的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
[0014]上述蛋白中，蛋白标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。其中，为了使(A1)中的蛋白质便于纯化，可在(A1)的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上标签。所述标签可以为Poly
‑
Arg(通常为6个RRRRR)，Poly
‑
His(通常为6个HHHHHH)，FLAG(DYKDDDDK)，Strep
‑
tag II(WSHPQFEK)或c
‑
myc(EQKLISEEDL)。
[0015]本专利技术的第二方面，提供编码血清淀粉样蛋白A的基因在如下(1)或(2)中的应用：
[0016](1)制备预防和/或治疗马立克氏病病毒所致疾病的药物；
[0017](2)制备抑制马立克氏病病毒复制的药物。
[0018]上述应用中，所述编码血清淀粉样蛋白A的基因为如下i)或ii)或iii)所示的核酸分子：
[0019]i)核苷酸序列是SEQ ID NO.2所示的核酸分子；
[0020]ii)与i)的核苷酸序列具有90％或90％以上同一性且表达相同功能蛋白质的核酸分子；
[0021]iii)除i)以外的编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的核酸分子。
[0022]所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
[0023]这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。同一性可以用计算机软件进行评价，例如可采用BLAST算法测定(Altschul et al.1990.Journal of Molecular Biology 215:403
‑
410；Karlin and Altschul.1993.Proceedings of the National Academy of Sciences 90:5873
‑
5877)。
[0024]上述核酸分子中，所述90％或90％以上同一性可以为至少90％、91％、92％、95％、96％、98％或99％的同一性。
[0025]本专利技术的第三方面，提供与血清淀粉样蛋白A相关的生物材料在如下(1)或(2)中的应用：
[0026](1)制备预防和/或治疗马立克氏病病毒所致疾病的药物；
[0027](2)制备抑制马立克氏病病毒复制的药物。
[0028]上述应用中，所述与血清淀粉样蛋白A相关的生物材料为如下任一所示：
[0029]B1)含有血清淀粉样蛋白A编码基因的重组表达载体；
[0030]B2)含有血清淀粉样蛋白A编码基因的重组微生物；
[0031]B3)含有血清淀粉样蛋白A编码基因的转基因细胞系；
[0032]所述血清淀粉样蛋白A编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0033]上述应用中，可以用现有的表达载体构建含有血清淀粉样蛋白A编码基因的重组表达载体。现有的表达载体可以为真核表达载体，例如PEX
‑
3载体(pGCMV/MCS/Neo)；也可以为原核表达载体，例如pET
‑
22b(+)载体质粒。使用本专利技术的血清淀粉样蛋白A编码基因构建
重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子等。
[0034]上述应用中，重组微生物具体可以为病毒(例如慢病毒)、酵母、细菌、藻类或真菌等。
[0035]本专利技术的第四方面，提供一种抑制马立克氏病病毒复制的药物，所述药物以有效量的血清淀粉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血清淀粉样蛋白A在如下(1)或(2)中的应用：(1)制备预防和/或治疗马立克氏病病毒所致疾病的药物；(2)制备抑制马立克氏病病毒复制的药物；所述血清淀粉样蛋白A是如下任一所示的蛋白质：A1)氨基酸序列为SEQ ID NO.1的蛋白质；A2)在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白。2.编码血清淀粉样蛋白A的基因在如下(1)或(2)中的应用：(1)制备预防和/或治疗马立克氏病病毒所致疾病的药物；(2)制备抑制马立克氏病病毒复制的药物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述编码血清淀粉样蛋白A的基因为如下i)或ii)或iii)所示的核酸分子：i)核苷酸序列是SEQ ID NO.2所示的核酸分子；ii)与i)的核苷酸序列具有90％或90％以上同一性且表达相同功能蛋白质的核酸分子；iii)除i)以外的编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的核酸分子。4.与血清淀粉样蛋白A相关的生物材料在如下(1)或...

【专利技术属性】
技术研发人员：成子强，杨剑豪，周德方，张利，周静，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：