特异性识别猪Wip1基因的sgRNA及其应用和产品制造技术

本发明专利技术提供了一种特异性识别猪Wip1基因的sgRNA及其应用和产品，涉及基因工程技术领域，本发明专利技术提供的特异性识别猪Wip1基因的sgRNA通过特定序列的选择，能够特异性识别猪Wip1基因的启动子前1500bp，且本发明专利技术提供的sgRNA用于CRISPR/Cas9系统。本发明专利技术通过实验发现，该sgRNA配合CRISPR/Cas9系统，敲除效率分别为35％、40％和43％，能够高效的对猪Wip1基因进行基因编辑操作，可实现猪细胞或者个体的基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
特异性识别猪Wip1基因的sgRNA及其应用和产品


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其是涉及一种特异性识别猪Wip1基因的sgRNA及其应用和产品。

技术介绍

[0002]猪是我国重要的家畜品种之一，其在农业经济、医学疾病模型和分子遗传学研究中均有重要地位。而基因编辑猪在生物学研究、农业新品种培育以及生物医药研究中具有重要的应用价值，CRISPR/Cas9系统的出现极大的提高了猪的基因编辑效率。
[0003]Wip1基因的全称是野生型p53诱导磷酸酶1(Wild
‑
type p53
‑
induced phosphatasel)，作为PP2C家族中的一员,Wip1由PPM1D(protein phosphatase,Mg
2+
/Mn
2+
dependent 1D)基因编码。研究报道Wip1基因通过调控机体内一些重要信号分子(如p53、p38MAPK、ATM等)，从而影响细胞发挥正常功能，此外，Wip1基因也在生殖调控、免疫调节、肿瘤发生等病理过程发挥重要影响。
[0004]因此对猪Wip1基因启动子前1500bp区域进行编辑，探索该区域调控元件对生殖，免疫及肿瘤等方面的调控，对猪的基因功能研究、新型基因编辑猪的制备和培育具有重要的应用价值。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供特异性识别猪Wip1基因的三条sgRNA，该sgRNA用于CRISPR/Cas9系统，能够特异性识别猪Wip1基因的启动子前1500bp区域。
[0007]本专利技术的第二目的在于提供一种含有编码上述sgRNA的序列的DNA分子。
[0008]本专利技术的第三目的在于提供一种对猪基因组中Wip1基因进行基因编辑的方法。
[0009]本专利技术的第四目的在于提供一种用于对猪基因组中Wip1基因进行基因编辑的试剂盒。
[0010]本专利技术的第五目的在于提供一种上述特异性识别猪Wip1基因的sgRNA或上述DNA分子的应用。
[0011]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0012]本专利技术提供了一种特异性识别猪Wip1基因的sgRNA，所述sgRNA包括sgRNA
‑
1、sgRNA
‑
2或sgRNA
‑
3中的一种或多种；
[0013]所述sgRNA
‑
1中负责识别靶片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0014]所述sgRNA
‑
2中负责识别靶片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0015]所述sgRNA
‑
3中负责识别靶片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0016]进一步的，所述sgRNA
‑
1具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；
[0017]可选地，所述sgRNA
‑
2具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；
[0018]可选地，所述sgRNA
‑
3具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。
[0019]本专利技术还提供了一种用于猪Wip1基因编辑的DNA分子，包含编码权利要求1或2所述的sgRNA的DNA分子。
[0020]进一步的，编码sgRNA
‑
1中负责识别靶片段的核苷酸序列的DNA分子序列如SEQ ID NO.8所示；
[0021]可选地，编码sgRNA
‑
2中负责识别靶片段的核苷酸序列的DNA分子序列如SEQ ID NO.9所示；
[0022]可选地，编码sgRNA
‑
3中负责识别靶片段的核苷酸序列的DNA分子序列如SEQ ID NO.10所示。
[0023]进一步的，编码所述sgRNA
‑
1的DNA分子序列如SEQ ID NO.11所示；
[0024]可选地，编码所述sgRNA
‑
2的DNA分子序列如SEQ ID NO.12所示；
[0025]可选地，编码所述sgRNA
‑
3的DNA分子序列如SEQ ID NO.13所示。
[0026]本专利技术还提供了一种对猪基因组中Wip1基因进行基因编辑的方法，所述方法包括将(a)和(b)导入猪源生物材料中，以对猪基因组中Wip1基因进行编辑；
[0027](a)上述sgRNA或上述DNA分子；
[0028](b)Cas9分子，所述Cas9分子包括Cas9蛋白分子或Cas9核酸分子；
[0029]优选地，所述猪源生物材料包括猪源细胞。
[0030]本专利技术还提供了一种试剂盒，包括上述的sgRNA或DNA分子。
[0031]本专利技术还提供了上述的sgRNA、DNA分子、方法或试剂盒在对猪进行基因编辑中的应用。以及，上述的sgRNA、DNA分子或试剂盒在制备对猪进行基因编辑的产品中的应用。
[0032]进一步的，所述对猪进行基因编辑包括对猪Wip1基因的启动子前1500bp的核苷酸序列进行编辑；
[0033]优选地，猪Wip1基因的启动子前1500bp的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0034]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0035]本专利技术提供的特异性识别猪Wip1基因的sgRNA能够特异性识别猪Wip1基因的启动子前1500bp，且本专利技术提供的sgRNA用于CRISPR/Cas9系统。本专利技术通过实验发现，该sgRNA配合CRISPR/Cas9系统，敲除效率分别为35％、40％和43％，能够高效的对猪Wip1基因进行基因编辑操作，可实现猪细胞或者个体的基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。
附图说明
[0036]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0037]图1为本专利技术实施例提供的3条sgRNA活性检测胶图。
具体实施方式
[0038]除非本文另有定义，连同本专利技术使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着
“
和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。
[0039]一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别猪Wip1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括sgRNA
‑
1、sgRNA
‑
2或sgRNA
‑
3中的一种或多种；所述sgRNA
‑
1中负责识别靶片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述sgRNA
‑
2中负责识别靶片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述sgRNA
‑
3中负责识别靶片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.据权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA
‑
1具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；可选地，所述sgRNA
‑
2具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；可选地，所述sgRNA
‑
3具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。3.一种用于猪Wip1基因编辑的DNA分子，其特征在于，包含编码权利要求1或2所述的sgRNA的DNA分子。4.根据权利要求3所述的DNA分子，其特征在于，编码sgRNA
‑
1中负责识别靶片段的核苷酸序列的DNA分子序列如SEQ ID NO.8所示；可选地，编码sgRNA
‑
2中负责识别靶片段的核苷酸序列的DNA分子序列如SEQ ID NO.9所示；可选地，编码sgRNA
‑
3中负责识别靶片段的核苷酸序列的DNA分子序列如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：王悦，李奎，牟玉莲，刘志国，冯政，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：