【技术实现步骤摘要】
一种在棒状杆菌中辅助sacB基因编辑系统的CRISPR
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cpf1筛选工具
[0001]本专利技术涉及一种在棒状杆菌中辅助sacB基因编辑系统的CRISPR
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cpf1筛选工具，属于基因工程领域。
技术介绍
[0002]棒状杆菌是目前白色生物技术的产业支柱，是公认的安全发酵菌株，它被广泛应用于有机酸、氨基酸及其衍生物的生产。随着分子生物学技术的发展，一些分子遗传工具被开发出来并应用到棒状杆菌的代谢工程改造中，以更有效地生产或者生产更多有价值的化学品。目前，已经对多株棒状杆菌进行了基因组测序，为深入了解棒状杆菌的代谢机制、发掘其更多生产功能提供了依据。基因编辑技术对棒状杆菌的研究至关重要，而现有的基因编辑技术都存在一定缺陷。
[0003]传统基因编辑技术主要依赖于同源重组，将含有目的基因两侧同源序列的外源DNA片段导入宿主菌，然后通过核酸链间等位替换的方式对目的基因进行突变、缺失或插入。在棒状杆菌中常用的传统基因编辑技术包括基于自杀质粒介导的同源重组系统(如pK18mobsacB)以...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基因编辑系统，其特征在于，所述编辑系统由带有目标基因同源修复模板的pK18mobsacB质粒及反向筛选工具组成；所述反向筛选工具含有靶向pK18mobsacB质粒的sgRNA的表达模块。2.根据权利要求1所述的基因编辑系统，其特征在于，所述反向筛选工具还含有Cpf1表达框、温敏型复制子pBL1ts。3.根据权利要求1或2所述的基因编辑系统，其特征在于，所述sgRNA的表达模块上的靶向位点为pK18mobsacB质粒上的任一位点。4.根据权利要求3所述的基因编辑系统，其特征在于，当靶向位点为pK18mobsacB质粒上的卡那霉素抗性基因时，所述反向筛选工具的序列如SEQ ID NO.1所示。5.一种编辑菌株的方法，其特征在于，利用权利要求1～4任一所述基因编辑系统对菌株进行两轮交换实现基因编辑。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，利用pK18mobsacB质粒转入宿主细胞中，培养、并验证获得第一轮交换菌...
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