大豆NLP基因的编辑位点及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种大豆NLP基因的编辑位点及其应用，属于生物技术领域。该大豆NLP基因的编辑位点包括5种基因编辑位点，分别为SEQ ID NO：1

【技术实现步骤摘要】
大豆NLP基因的编辑位点及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，涉及大豆NLP基因的编辑位点，尤其涉及其大豆GmNLP4a/b、GmNLP5a/b基因编辑位点及其应用。

技术介绍

[0002]氮是植物体内的必需大量元素，是蛋白质、核苷酸的必要成分，在多方面影响着植物的代谢过程和生长发育，是植物生命活动的基础。植物获取氮的途径主要包括大气中N2的固定、土壤中N的吸收等(罗绪强等,2007)。虽然空气中含有约78.1％的N2，但是植物不能直接吸收利用，且土壤中的氮有限，不能满足植物氮的需求。为此，人们大量使用化学氮肥，以谋求植物的产量增加。氮肥的生产及运输成本昂贵，且随着氮肥使用量的增加，引发了一系列的环境问题，包括水体、大气、土壤甚至整个生态系统的氮富集污染现象，严重破坏地球的生态化学循环，影响人类健康(陆宇燕等,2014)。生物固氮，尤其是豆科植物与根瘤菌的共生固氮，是自然界中固氮效率最高(罗振鹏等,2019)，降低对化学氮肥的依赖，增加植物产量最为有效的途径之一。
[0003]大豆(Glycine max(L.)Merr.)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大豆NLP基因的编辑位点，其特征在于，所述NLP基因包括：NLP4a、NLP4b、NLP5a和NLP5b；所述NLP4a基因的基因编辑位点为：三段23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4，其在大豆基因组的准确定位分别是10号染色体NLP4a基因CDS的118
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140、170
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192、235
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257处，染色体的坐标分别为46384350
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46384328、46384298
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46384276、46384233
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46384211；无效基因编辑位点为一段23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述NLP4b基因的基因编辑位点为：两段23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2，其在大豆基因组的准确定位分别是20号染色体NLP4b基因CDS的112
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134、164
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186处，染色体的坐标分别为39832266
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39832288、39832318
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39832340；所述NLP5a基因的基因编辑位点为：两段23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，核苷酸序列分别为SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6，其在大豆基因组的准确定位分别是9号染色体NLP5a基因CDS的184
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206、678
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700处，染色体的坐标分别为34817746
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34817724、34816595
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34816573；无效基因编辑位点为两段23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示；所述NLP5b基因的基因编辑位点为：两段23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，核苷酸序列分别如为SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6，其在大豆基因组的准确定位分别是16号染色体NLP5b基因CDS的184
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206、675
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697处，染色体的坐标分别为34544795
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34544773、34543570
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34543548。2.一种权利要求1所述大豆NLP基因的编辑位点的应用，其特征在于，所述大豆NLP基因的编辑位点3
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端含有NGG，通过sgRNA与基因组PAM位点附近的DNA碱基互补配对，介导Cas9核酸内切酶靶向识别基因组并实现基因组DNA的双链断裂，诱发DNA损伤修复机制，在修复过程中随机引入或删除核苷酸对，导致目标靶点核苷酸对的删除或插入，造成目标靶点附近的突变。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，用于培育改变结瘤性状和/或产量的大豆突变体。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)按照SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：8的大豆NLP4a/b、NLP5a/b基因编辑位点的序列合成sgRNA；(2)在SEQ ID NO：1sgRNA的5
’
端添加碱基接头，获得SEQ ID NO：9的正向核苷酸序列引物，将其反向互补得到sgRNA的反向序列，在其5
’
端同样添加碱基接头，获得SEQ ID NO：10的反向核苷酸序列引物；将SEQ ID NO：9与SEQ ID NO：10退火，形成双链DNA；将SEQ ID NO：2sgRNA反向后在5
’
端添加碱基接头，获得SEQ ID NO：11的正向核苷酸序列引物，将其反向互补得到sgRNA的反向序列，在其5
’
端同样添加碱基接头，获得SEQ ID NO：12的反向核苷酸序列引物；将SEQ ID NO：11与SEQ ID NO：12退火，形成双链DNA；将SEQ ID NO：3sgR...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔凡江，廖春梅，陈丽玉，杨涔，
申请(专利权)人：广州大学，
类型：发明
国别省市：