一株烟酸芽孢杆菌FY2及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，涉及一株烟酸芽孢杆菌FY2及其应用，所述烟酸芽孢杆菌FY2的菌株保藏编号为：CCTCC NO:M 2022017，保藏日期为2022年01月05日。本发明专利技术筛选得到的烟酸芽孢杆菌FY2培养物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果非常明显，烟酸芽孢杆菌FY2发酵上清液和烟酸芽孢杆菌FY2产生的细菌素对大肠杆菌、沙门菌、志贺菌和节杆菌均有抑制作用。志贺菌和节杆菌均有抑制作用。志贺菌和节杆菌均有抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
一株烟酸芽孢杆菌FY2及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，涉及一株烟酸芽孢杆菌FY2及其应用。

技术介绍

[0002]目前，抗生素导致病原菌产生耐药性，造成环境污染和食品安全等问题越来越严重，因此，益生菌作为抗生素的替代品，越来越多应用于畜牧养殖、水产养殖、环境治理等方面。金黄色葡萄球菌是一种可感染动物和人类的重要病原菌，为球形呈葡萄串状排列的革兰阳性菌。该菌具有较强的抵抗力，在自然界中广泛分布，如空气、水、灰尘和动物排泄物中都可存在，因此，食品很容易受其污染，金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒在细菌性食物中毒所占比例较高。另外，还可引起人类化脓性感染，以及肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至发生败血症、脓毒血症等全身感染。当前，耐甲氧西林和其他抗生素的金黄色葡萄球菌广泛流行，万古霉素耐药菌株也有所增加，给临床治疗带来很大困难。安全高效的抗菌药替代品的研发与应用，既能够防控细菌性疾病为健康养殖提供良好技术基础，又能减少抗菌药物残留所带来的公共卫生安全问题。因此，研究者们正在努力寻找不易产生耐药性且有抗菌活性的物质来代替抗菌药物治疗细菌疾病。细菌素是某些细菌在代谢过程中由核糖体合成并分泌到胞外的具有抗菌活性的蛋白质或肽类，可以阻碍某些微生物的生长且不易产生抗药性，可以被一些酶类降解，对人体不会产生致病作用，具有替代抗菌药物的巨大潜力。
[0003]针对细菌耐药性问题，目前解决方案有：(1)积极研发新型抗菌药物，简化、加速抗菌药物的审批程序。根据药物作用机制改进药物结构和治疗效果，新一代药物在一定时期内抑菌作用明显，效果显著，但随着时间的延长微生物也会对其产生耐药性。缺点：药物的研发在一定时间内有效，可抑制病原菌，但用药不合理不规范导致的耐药性还会出现。(2)研发中草药制剂，从中草药中提取具有低毒副作用、无抗药性、功能多样等特点的多糖等生物活性物质，发挥抗细菌、抗病毒、抗应激、提高机体免疫力、促进动物生长等作用。缺点：中草药种类太多，筛选范围太大，并且对病原菌的抑菌作用特异性针对性不强，主要是提高机体抗病力。(3)噬菌体的分离鉴定，某些耐药菌特异性的噬菌体分离纯化后可有效杀死相应病原菌，具有不产生耐药性、无残留、毒副作用校、制备相对容易、成本低等特点。缺点：不是所有的耐药性细菌都有特定的噬菌体，并且噬菌体的分离培养和应用技术还不够成熟。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题在于针对现有技术的不足，提供了一株烟酸芽孢杆菌FY2及其应用，所述烟酸芽孢杆菌FY2的菌株培养物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果非常明显，烟酸芽孢杆菌FY2发酵上清液和烟酸芽孢杆菌FY2产生的细菌素对大肠杆菌、沙门菌、志贺菌和节杆菌均有抑制作用。
[0005]本专利技术提供了一株烟酸芽孢杆菌(Neobacillus niacini)FY2，所述烟酸芽孢杆菌FY2的保藏编号为：CCTCC NO:M 2022017，保藏日期为2022年01月05日。
[0006]本专利技术还提供了一种所述的烟酸芽孢杆菌FY2制备得到的发酵上清液。
[0007]本专利技术还提供了一种所述的发酵上清液的制备方法，包括如下步骤：将烟酸芽孢杆菌FY2菌株接种至LB肉汤培养基中，30℃，180rpm振荡培养24h，5000rpm离心15min，除去菌体，保留上清即为FY2菌株的发酵上清液。
[0008]本专利技术还提供了一种所述的烟酸芽孢杆菌FY2产生的细菌素。
[0009]本专利技术还提供了所述的细菌素的制备方法，包括如下步骤：用浓盐酸将发酵上清液的pH值调至2.0，4℃过夜处理，再用10000rpmin离心15min，弃去上清，沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，获得粗提细菌素。
[0010]进一步的，所述病原菌包括大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、山羊节杆菌。
[0011]本专利技术还提供了一种所述的烟酸芽孢杆菌FY2制备得到的FY2菌株培养物。
[0012]本专利技术还提供了一种所述的FY2菌株培养物的制备方法，包括如下步骤：将烟酸芽孢杆菌FY2菌株接种至LB肉汤培养基中，37℃，180rpm振荡培养24h，获得FY2菌株的培养物。
[0013]本专利技术还提供了一种所述的FY2菌株培养物在抑制病原菌中的应用。
[0014]进一步的，所述病原菌为金黄色葡萄球菌。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0016]1、本专利技术中分离鉴定得到了一株烟酸芽孢杆菌FY2菌株，发现其菌株培养物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果非常明显，抑菌圈直径可达20mm；其发酵上清液和粗提细菌素对禽源大肠杆菌、沙门菌、志贺菌，以及山羊节杆菌也有一定的抑制作用。
[0017]生物材料保藏信息说明
[0018]FY2，在本申请中称作烟酸芽孢杆菌FY2，已于2022年01月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2022017，保藏单位地址是中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，分类命名为烟酸芽孢杆菌FY2(Neobacillus niacini FY2)。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为本专利技术中烟酸芽孢杆菌FY2普通营养琼脂培养特征；
[0021]图2为本专利技术中烟酸芽孢杆菌FY2 TSA琼脂培养特征；
[0022]图3为本专利技术中烟酸芽孢杆菌FY2LB肉汤培养基培养特征；
[0023]图4为本专利技术中烟酸芽孢杆菌FY2革兰染色镜检结果；
[0024]图5为本专利技术中烟酸芽孢杆菌FY2的生化试验结果，其中，从左至右分别表示麦芽糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甲基红试验、二乙酰试验、吲哚形成试验；
[0025]图6为本专利技术中烟酸芽孢杆菌FY2和9株烟酸芽孢杆菌参考菌株16S rRNA基因序列的同源性分析结果；图中seq1表示本专利技术中的FY2菌株序列，参考菌株均用Genbank登录号表示。
[0026]图7为本专利技术中基于烟酸芽孢杆菌16S rRNA基因序列构建的遗传进化树；图中seq1表示本专利技术中的FY2菌株序列，其它菌株均用Genbank登录号表示。
[0027]图8为本专利技术中烟酸芽孢杆菌FY2对金黄色葡萄球菌的抑菌结果；平板中的标记分别表示：9，发酵上清液；10，细菌素；11，FY2菌株培养物。
具体实施方式
[0028]下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0029]实施例1
[0030]本专利技术是从实验室中一块培养金黄色葡萄球菌的营养琼脂培养基上偶然发现的一种细菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株烟酸芽孢杆菌(Neobacillus niacini)FY2，其特征在于，所述烟酸芽孢杆菌FY2的保藏编号为：CCTCC NO:M 2022017，保藏日期为2022年01月05日。2.一种权利要求1所述的烟酸芽孢杆菌FY2制备得到的发酵上清液。3.一种权利要求2所述的发酵上清液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将烟酸芽孢杆菌FY2菌株接种至LB肉汤培养基中，30℃，180rpm振荡培养24h，5000rpm离心15min，除去菌体，保留上清即为FY2菌株的发酵上清液。4.一种权利要求1所述的烟酸芽孢杆菌FY2产生的细菌素。5.一种权利要求4所述的细菌素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：用浓盐酸将发酵上清液的pH值调至2.0，4℃过夜处理，再...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭伟娜，路振香，卫文娟，王雨欣，曾凡俊，李文超，贺绍君，刘德义，
申请(专利权)人：安徽科技学院，
类型：发明
国别省市：