用于降低色谱中生物负载的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了用于各种色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括在大规模的基于蛋白A的亲和色谱柱的背景下的生物负载降低。低。

【技术实现步骤摘要】
用于降低色谱中生物负载的组合物和方法
[0001]本申请是申请日为2018年1月29日、申请号为201880008672.3(PCT/US2018/015764)、专利技术名称为“用于降低色谱中生物负载的组合物和方法”的中国专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2017年1月30日提交的美国临时申请No.62/452,140的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。


[0004]本专利技术提供了用于各种色谱基质的微生物生物负载降低的方法，包括在大规模基于蛋白A的亲和色谱柱的背景下的生物负载降低。

技术介绍

[0005]抗体药物是最普遍的生物制药产品。例如用天然或工程化的葡萄球菌蛋白A配体进行的亲合色谱被广泛用作抗体药物制造过程中的捕获方法，以除去杂质和污染物。蛋白A结合抗体的Fc区，蛋白A柱被认为对单克隆抗体的纯化具有选择性。使用蛋白A的亲和层析通常涉及原位清洗(CIP)步骤以清洁和去除与柱结合的杂质，例如沉淀或变性物质。CIP通常用氢氧化钠溶液进行。
[0006]除了清洁之外，氢氧化钠溶液或具有苯甲醇的磷酸溶液用于减少蛋白A色谱基质或柱中的微生物数量。来自用于培养产生单克隆抗体的细胞的培养基的细菌，以及相关的宿主细胞蛋白和DNA，可以在使用过程中快速增加蛋白A柱的生物负载。随着细菌和微生物在柱上累积，生物负载增加。随着生物负载的增加，柱性能通常会退化。这种退化的迹象包括产物纯度降低、柱填充劣化和背压增加。
[0007]管理和降低蛋白A柱上的微生物生物负载是重要的，因为蛋白A柱非常昂贵，这种亲和柱的填充和拆卸是劳动密集型的。为了避免更换蛋白A柱或在蛋白A柱纯化上游添加工艺步骤的费用，需要找到试剂，其能快速从柱中除去大量生物负载，而不会对蛋白A的结构和功能产生负面影响，并且下游影响很小。
[0008]微生物生物负载降低的重要性不限于蛋白A色谱基质，还包括具有与载体偶联的蛋白质配体的其他色谱基质，以及不涉及蛋白质配体的基质，例如各种离子交换色谱基质、疏水相互作用色谱(HIC)基质、混合模式色谱基质、尺寸排阻色谱基质等。
[0009]在良好生产规范(GMP)或现行良好生产规范(CGMP)的背景下，色谱基质的微生物生物负载降低尤其重要。这些实践必须提供制造步骤和产品质量的一致性，以满足监管机构的要求，如美国食品和药物管理局。GMP和CGMP要求制造过程中的高度可预测性和标准化，特别是确保用于人类患者的制造的治疗性生物分子的纯度。随着生产生物分子的生长培养物所涉及的劳动力，当发生故障时会产生巨大的费用。过量的生物负载会降低色谱柱性能，这会干扰以标准化和可预测的方式纯化产品，并可能导致其他故障点被触发。
[0010]本领域目前已知的降低生物负荷的试剂具有负的下游效应。例如，基于氢氧化钠
的溶液和基于磷酸与苯甲醇的溶液可有效杀灭微生物，但也倾向于使蛋白质配体(例如蛋白A)变性，从而对其功能产生负面影响。
[0011]此外，这些溶液的氧化剂和其他组分可以与纯化的单克隆抗体一起保留，并进一步在下游降解它们。
[0012]因此，本领域普通技术人员理解，难以降低色谱基质中的生物负载，尤其是在具有蛋白质配体的基质中，例如蛋白A色谱基质。

技术实现思路

[0013]如上所述，需要可以在大规模GMP和CGMP的背景下使用的新的有效方法，以降低各种色谱基质的微生物生物负载，尤其是涉及蛋白质配体如蛋白A的那些。本专利技术通过提供用于降低色谱基质的微生物生物负载的组合物和方法来解决这个和其他需要。
[0014]在一个方面，本专利技术提供了一种用于色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与包含约0.1M至约0.5M乙酸的组合物接触，其中接触步骤进行至少约2小时。
[0015]在相关方面，本专利技术提供了用于色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与包含约0.5M至约1.0M乙酸的组合物接触，其中接触步骤进行至少约1小时。
[0016]在相关方面，本专利技术提供了用于色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与包含约0.1M至约1.0M乙酸的组合物接触，其中所述接触步骤在色谱基质中产生以下一项或多项结果：产芽孢细菌量降低至少3log
10
，革兰氏阳性菌量降低至少5log
10
，和革兰氏阴性菌量降低至少5log
10
。
[0017]在另一方面，本专利技术提供了用于色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与包含约4.0M至约12.0M脲(urea)的组合物接触，其中接触步骤进行至少约30分钟。
[0018]在相关方面，本专利技术提供了用于色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与包含约4.0M至约12.0M脲的组合物接触，其中所述接触步骤在色谱基质中产生以下一项或多项结果：产芽孢细菌量降低至少2log
10
，革兰氏阳性菌量降低至少5log
10
，和革兰氏阴性菌量降低至少5log
10
。
[0019]在一个实施方案中，本专利技术提供了用于MabSelect
TM
Xtra色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与基本由约0.5M乙酸组成的组合物接触，其中接触步骤进行至少约4小时。
[0020]在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于MabSelect
TM
Xtra色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与基本上由约0.1M乙酸和约20％乙醇组成的组合物接触，其中接触步骤进行至少约4小时。
[0021]在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于MabSelect
TM
Xtra色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与基本上由约8M脲组成的组合物接触，其中接触步骤进行至少约1小时。
[0022]在又一个实施方案中，本专利技术提供了用于MabSelect
TM
Xtra色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与基本上由约8M脲和约20％乙醇组成的组合物
接触，其中接触步骤进行至少约1小时。
[0023]在一个实施方案中，本专利技术提供了一种在施用包含用于纯化的药剂的组合物之前降低微生物负荷的方法，所述方法包括(a)提供色谱基质；(b)执行本专利技术的任何上述方法；(c)将包含药剂的组合物施加于色谱基质。
[0024]在以下描述、权利要求和附图中，本专利技术的这些和其他方面对于本领域普通技术人员将是显而易见的。
附图说明
[0025]图1示出了在含有0.5M乙酸的溶液中的加标研究的结果。在不存在色谱基质的溶液中测量细菌杀灭的程度。黑色条代表类坚强芽孢杆菌(Bacillus psuedofirmus)的量，对角条纹条代表MabSelect
TM Xtra柱中暴露于0.5乙酸前本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与包含约4.0M至约12.0M脲的组合物接触，其中接触步骤进行至少约30分钟。2.权利要求1的方法，其中接触步骤进行至少约1小时。3.权利要求1或权利要求2的方法，其中组合物包含约8M脲。4.权利要求1
‑
3中任一项的方法，其中组合物还包含醇。5.权利要求4的方法，其中所述醇为乙醇或苯甲醇。6.权利要求5的方法，其中组合物包含约20％乙醇。7.权利要求5的方法，其中组合物包含约1％至约2％苯甲醇。8.用于色谱基质的微生物生物负载降低的方法，所述方法包括使色谱基质与包含约4.0M至约12.0M脲的组合物接触，其中所述接触步骤在色谱基质中产生以下一项或多项结果：产芽孢细菌量降低至少2log
10
，革兰氏阳性菌量降低至少5log
10
，和革兰氏阴性菌量降低至少5log
10
。9.权利要求8的方法，其中组合物还包含醇。10.权利要求9的方法，其中所述醇为乙醇或苯甲醇。11.权利要求10的方法，其中组合物包含约20％乙醇。12.权利要求10的方法，其中组合物包含约1％至约2％的苯甲醇。13.权利要求8的方法，其中所述接触步骤导致色谱基质中产芽孢细菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的一种或多种的量降低至低于选自以下测定的检测限：(1)生物过滤测定、(2)显微细菌染色、(3)IR/FTIR光谱法、(4)无菌试验和(5)细菌鉴定试验。14.权利要求13的方法，其中所述产芽孢细菌为类坚强芽孢杆菌(Bacillus pseudofirmus)，革兰氏阳性菌为微杆菌属(Microbacterium spp.)，和革兰氏阴性菌为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。15.权利要求中1
‑
14任一项的方法，其中接触步骤在15℃至30℃的温度进行。16.权利要求15的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：