一种重组人CDC5L融合蛋白水凝胶、制备方法及应用技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，公开了一种重组人CDC5L融合蛋白水凝胶、制备方法及应用，融合蛋白包括CDC5L蛋白序列和穿膜肽序列，所述CDC5L蛋白序列和所述穿膜肽序列通过连接肽连接；CDC5L蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，所述融合蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO：3。本发明专利技术在心肌缺血损伤后通过缺血边缘区心肌内局部注射给药可通过激活心肌增殖再生的关键通路来促进心肌细胞细胞周期进程、DNA合成和有丝分裂等生物学活动，促进心肌细胞增殖，达到减少心肌缺血梗死面积和瘢痕形成，减少心梗后心脏损伤，促进心功能恢复的治疗作用。促进心功能恢复的治疗作用。促进心功能恢复的治疗作用。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人CDC5L融合蛋白水凝胶、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，尤其涉及一种重组人CDC5L融合蛋白水凝胶、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]目前，缺血性心脏病，是造成中国居民死亡的主要原因之一。其中，心肌梗死是其最严重的表现形式。由于成年心肌细胞退出细胞周期，失去增殖能力，缺血坏死心肌不能被新生的正常心肌细胞所替代修复，因此梗死区组织只能被纤维瘢痕所取代。这一病理过程会导致心脏重构和心力衰竭，甚至最终导致患者死亡。
[0003]目前，心梗后相关治疗主要聚焦于经皮冠脉介入治疗、冠脉旁路移植和药物溶栓等缺血后再灌注治疗手段。然而这只能改善心肌梗死后缺血区心肌组织的血供，并不能挽救坏死的心肌细胞和增加减少的心肌细胞数量。虽然心脏移植可以彻底解决心脏损伤引起的严重心力衰竭，但供体的缺乏限制了该治疗的临床应用。因此，探索促进心肌增殖再生的有效策略对于心肌缺血损伤的修复和心梗后疾病进展的预防具有重要意义。
[0004]CDC5L是一种参与细胞周期控制的DNA结合蛋白，可以作为转录激活剂，在mRNA前体剪接中发挥作用。此外CDC5L也作为PRP19
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CDCL5复合物的核心成分参与DNA损伤修复反应。该蛋白质已在肿瘤细胞中被发现能够促进膀胱癌细胞增殖、抑制细胞凋亡和促进癌症进展。
[0005]检索国内外最新文献发现，尚没有关于CDC5L蛋白能够促进心肌细胞增殖再生或改善损伤后心功能恢复的文献报道。
[0006]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：
[0007](1)现有的心梗后相关治疗方法只能改善心肌梗死后缺血区心肌组织的血供，并不能挽救坏死的心肌细胞和增加减少的心肌细胞数量。
[0008](2)现有心梗后相关治疗方法中，心脏移植供体的缺乏限制了其临床应用。
[0009](3)目前尚未有关于CDC5L蛋白能够促进心肌细胞增殖再生或改善损伤后心功能恢复的文献报道。
[0010]解决以上问题及缺陷的难度为：
[0011]目前心肌再生以及心肌修复研究方向的科研成果较少，并且往临床转化存在较大的困难，至今还未有成熟可靠的方法能够实施于临床，改善患者心脏受损后的心功能恢复。
[0012]解决以上问题及缺陷的意义为：
[0013]探索CDC5L促进心肌增殖再生的有效策略对于心肌缺血损伤的修复和心梗后疾病进展的预防具有重要意义。将CDC5L重组蛋白与水凝胶相结合可以有效改善动物的心功能和促进心肌再生。这为临床病人的治疗提供了一种新的治疗策略。

技术实现思路

[0014]针对现有急性心肌梗死后心肌再生修复疗法存在的问题，本专利技术提供了一种重组
人CDC5L融合蛋白水凝胶、制备方法及应用，尤其涉及一种促进心肌缺血后损伤的连接穿膜肽的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶产品、制备方法及其促进心功能恢复和心肌再生的功能应用。
[0015]本专利技术是这样实现的，一种CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白，所述融合蛋白包括CDC5L蛋白序列和穿膜肽序列，所述CDC5L蛋白序列和所述穿膜肽序列通过连接肽连接。
[0016]进一步，所述CDC5L蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。
[0017]进一步，所述穿膜肽选自Pep
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1、MPGΔNLS、TAT、MPG以及Transportan中的任意一个。
[0018]PEP
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1:KETWWETWWTEWSQPKKRKV
[0019]MPGΔNLS:GLAFLGFLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV
[0020]TAT:RKKRRQRRR
[0021]MPG:GLAFLGFLGAAGSTMGAWSQPKKKRKV
[0022]Transportan:GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL
[0023]进一步，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，所述融合蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO：3。
[0024]本专利技术的另一目的在于提供一种应用所述的CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶，所述重组人CDC5L融合蛋白水凝胶由融合蛋白与成胶前体分子在水相中混匀而成，所述成胶前体分子为dFEFKdFEFKYRGD。
[0025]进一步，所述融合蛋白与成胶前体分子的质量比为1：(1.9～2.1)。
[0026]本专利技术的另一目的在于提供一种所述的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶的制备方法，所述重组人CDC5L融合蛋白水凝胶的制备方法包括以下步骤：
[0027]步骤一，配置A液：称取所述成胶前体分子粉末，加入双蒸水在室温下充分溶解，过滤除菌，称取无菌碳酸氢钠调节pH，定容，得A液，备用；
[0028]步骤二，配置B液：取含有所述融合蛋白的溶液，加入无菌PBS稀释，得B液，备用；
[0029]步骤三，制备水凝胶：在室温下将A液和B液混合，用移液枪缓慢吹打混匀，得到目的水凝胶。
[0030]进一步，所述步骤一中的最终PH为7.3～7.5，最终A液成胶前体分子浓度为18～22mg/mL；所述步骤二中的最终蛋白溶液的浓度为9～11mg/mL。
[0031]本专利技术的另一目的在于提供一种所述的CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白在制备治疗缺血性心肌病药物中的应用，所述缺血性心肌病选自冠状动脉粥样硬化、心肌缺血损伤、急性心肌梗死、心肌缺血或梗死引起的心律失常、陈旧性心肌梗死以及心梗后心室重构中的任意一种或几种。
[0032]本专利技术另一目的在于提供一种试剂盒，所述试剂盒包含所述的CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白中的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、Pep
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1、MPGΔNLS、TAT、MPG以及Transportan序列。
[0033]结合上述的所有技术方案，本专利技术所具备的优点及积极效果为：本专利技术提供的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶中，重组人CDC5L融合蛋白包括CDC5L蛋白序列和穿膜肽序列，在心肌缺血损伤后通过缺血边缘区心肌内局部注射给药可通过激活心肌增殖再生的特定关
键通路来促进心肌细胞细胞周期进程、DNA合成和有丝分裂等生物学活动，促进心肌细胞增殖，从而达到减少心肌缺血梗死面积和瘢痕形成，减少心梗后心脏损伤，促进心功能恢复的治疗作用。同时水凝胶发生液
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固相转化形成三维网状结构可实现药物的缓慢释放和发挥作用；同时为心室提供机械支撑力，延缓心室重构。
[0034]与现有技术相比，本专利技术涉及的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶还具有如下优点和进步性：
[0035](1)本专利技术以小分子水凝胶作为载体携带重组人CDC5L蛋白，通过注射器注射至急性心肌梗死边缘区心肌内，液体形态注射入心脏局部的小分子水凝胶可以充分贴合心梗创面，体温下凝胶液
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白，其特征在于，所述CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白包括CDC5L蛋白序列和穿膜肽序列，所述CDC5L蛋白序列和所述穿膜肽序列通过连接肽连接；所述CDC5L蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。2.如权利要求1所述的CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：2。3.如权利要求1所述的CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO：3。4.一种应用如权利要求1～3任意一项所述的CDC5L蛋白与穿膜肽的融合蛋白的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶，其特征在于，所述重组人CDC5L融合蛋白水凝胶由融合蛋白与成胶前体分子在水相中混匀而成，所述成胶前体分子为温控胶。5.如权利要求4所述的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶，其特征在于，所述融合蛋白与温控胶成胶前体分子的质量比为1：(1.9～2.1)。6.一种如权利要求4～5任意一项所述的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶的重组人CDC5L融合蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于，所述重组人CDC5L融合蛋白水凝胶的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚飞，韦天文，陈嘉文，单天凯，陈宇琼，王建康，张俊，张海锋，孙康云，
申请(专利权)人：苏州市立医院，
类型：发明
国别省市：