miRNA分子作为早期肺癌检测标志物的应用制造技术

本发明专利技术提供了miRNA分子标志物在制备早期肺癌检测试剂中的应用，涉及生物医学技术领域。所述miRNA分子标志物包括miR

【技术实现步骤摘要】
miRNA分子作为早期肺癌检测标志物的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及miRNA分子标志物在制备早期肺癌检测试剂中的应用。

技术介绍

[0002]早期筛查及诊断是降低肺癌死亡率的关键手段之一，而早期筛查的敏感性是评判筛查效果的一个重要方面。低剂量螺旋计算机断层扫描(low
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dose spiral CT，LDCT)是目前常用的肺癌筛查手段之一，已被证明能显著降低肺癌的死亡率，但存在一定的假阳性率，甚至还有可能产生潜在的辐射诱发癌变和增加医疗卫生费用等问题，并且对检测仪器有一定的要求，因此临床应用受限。其他常用的影像学检查尽管在肺癌筛查上发挥了重要的作用，但仍然存在漏诊或过度诊断等问题，难以作为肺癌早期筛查的有效方法，因此需要其他筛查手段加以补充。
[0003]近些年来，基于表观遗传学、液体活检和生物标志物等肺癌检测技术层出不穷，为肺癌早期筛查与诊断奠定了良好的基础。尽管多种血液肿瘤标志物已被广泛应用，但由于它们在检测癌细胞方面仍存在敏感性和特异性相对较低的情况，在肺癌早期诊断中均不能令人满意，因此必须探索新的潜在肿瘤标志物来提高筛查和诊断水平。
[0004]微小核糖核苷酸(microRNA、miRNA)是一类高度保守的、长度约22个核苷酸的内源性非编码RNA分子，参与发育、分化、信号转导和宿主感染应答等生物过程，与肿瘤的发生、发展密切相关。miRNA由于在肺癌患者的肿瘤组织、血液、痰液和胸腔积液等体液中稳定性高，能够快速定量，单独或联合联测有较好的灵敏度和特异度，目前在肺癌早筛早诊中有一定的应用价值。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种微小RNA标志物(miRNA分子标志物)在制备早期肺癌检测试剂中的应用。
[0007]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0008]在一个方面，本专利技术提供了miRNA分子标志物在制备早期肺癌检测试剂中的应用，所述miRNA分子标志物包括miR
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5p。
[0009]微小RNA(miRNA)选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA。在一个具体优选的实施方案中，所述miRNA分子标志物为成熟miR
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5p。
[0010]在本专利技术中，微小RNA还包括组成型核酸分子的功能等同物(即变体)，其显示完整微小RNA核酸分子相同的功能，尽管它们通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。所述变体与对应野生型miRNA基因产物具有少于100％(例如90％以上，包括但不限于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、
99.6％、99.7％、99.8％、99.9％)的同一性且具有对应野生型miRNA基因产物的一个或多个生物活性的miRNA。
[0011]在本专利技术的一个实施方案中，所述早期肺癌为I期和II期的非小细胞肺癌。所述肺癌早期指临床上确诊为I期和II期的非小细胞肺癌，所述miRNA标志物能够区分肺癌早期患者与健康人；在肺癌早期患者与健康人之间的表达水平具有统计学显著差异。
[0012]在本专利技术中，当测定样本中所述miRNA分子的表达水平时，与健康对照相比，如待测样品中所述miRNA分子标志物的表达水平显著改变(显著更高)，则显示其患有早期肺癌或罹患早期肺癌的风险很高。
[0013]在另一个方面，本专利技术提供了检测前述miRNA分子标志物表达水平的试剂在制备筛查/诊断早期肺癌的产品中的应用，所述产品包括试剂盒、试纸或芯片。例如定量检测miR
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5p表达量的试剂在制备诊断或辅助诊断早期肺癌的试剂盒中的应用。进一步地，所述试剂盒包括针对miR
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5p的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miR
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5p的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR
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5p的引物和/或探针；所述高通量测序平台包括针对miR
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5p的引物和/或探针。
[0014]在一个实施方案中，所述试剂包括通过使用qRT
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PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测前述的miRNA分子标志物(miR
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5p)的水平的试剂。
[0015]在一个实施方案中，检测试剂种类不受限制，只要能检测前面所述的miRNA标志物表达水平的试剂均可，所述试剂包括用于检测miR
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5p表达的特异性引物和/或探针。
[0016]在一个实施方案中，所述试剂盒还包含逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、RNA酶抑制剂中的一种或多种。
[0017]在一个实施方案中，所述筛查/诊断早期肺癌的产品用于测量受试者样品中所述miRNA分子标志物的表达水平，将其与无患病对照样品的miRNA分子标志物的表达水平进行比较。进一步地，与无患病对照样品相比，所述受试者样品中miRNA显示显著更高的差异表达，检测或诊断所述受试者患有早期肺癌或罹患早期肺癌风险高。根据受试者miR
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5p与正常健康对照的表达水平差异，筛查受试者是否患有早期肺癌；如果检测结果显示受试者微miR
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5p或其前体的水平显著高于正常或对照样品中的水平，则提示所述对象早期肺癌预后不良。
[0018]在一个实施方案中，所述产品的检测对象为血清或血浆。
[0019]本专利技术中“微小RNA”与“miRNA”、“miR”通用具有相同的含义。
[0020]本专利技术的miRNA分子标志物也可用于制备或筛选人早期肺癌的治疗药物中的应用。
[0021]在一个实施方案中，本专利技术还提供了所述miRNA分子标志物的表达水平的检测方法包括：
[0022](1)从受试者的外周血样本中获取血浆并提取总RNA，逆转录得到cDNA；
[0023](2)测量所述前述miRNA生物标志物的表达水平；采用相对定量法对血浆中miRNA含量进行分析，得到miRNA的相对表达量。
[0024]在一个实施方案中，本专利技术还提供了所述miRNA分子标志物的筛选方法：
[0025](a)提取早期肺癌患者(肺腺癌和肺鳞癌)病例组和无癌对照组的血浆样本，提取
的总RNA，构建miR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miRNA分子标志物在制备早期肺癌检测试剂中的应用，其特征在于，所述miRNA分子标志物包括miR
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5p。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述早期肺癌为I期和II期的非小细胞肺癌。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR
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5p为成熟miR
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5p。4.检测权利要求1所述的miRNA分子标志物表达水平的试剂在制备筛查/诊断早期肺癌的产品中的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒、试纸或芯片。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括通过使用qRT
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PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘洋，林婷婷，王赛赛，宋治鹏，董静，吕霞丽，潘丽萍，张宗德，
申请(专利权)人：北京市结核病胸部肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：