【技术实现步骤摘要】
一种多基因载体系统及其应用
[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种多基因载体系统及其应用。
技术介绍
[0002]基因载体是基因工程的重要工具之一。传统的载体构建方法包括利用限制性内切酶和DNA连接酶进行的酶切连接载体构建法；利用重组酶催化的同源重组交换构建法。
[0003]酶切连接载体构建法依赖于载体上的多克隆位点，只有载体上和目的基因所携带多克隆位点相匹配，才能将目的基因与载体在酶切后进行连接。然而载体上的多克隆位点数目是有限的，因此酶切连接法仅满足单个或少数个基因的载体组装。同源重组法包括λ
‑
att系统和Cre
‑
LoxP系统。λ
‑
att系统中att位点含有7bp核心重组区和两侧同源臂区，在重组酶催化下，对应的att位点之间发生重组时目的基因被组装到载体。常用的att位点包括attB、attP、attL、attR，其中attB和attP位点在BP clonase重组酶催化下融合产生attL位点以及包含attR位点的副产物，attL和att...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种多基因载体系统，包含：接受载体p32RR、接头供体载体pP1dor和基因供体载体pGedor；所述接受载体p32RR包含：一对BP或LR重组酶识别的特异重组位点：Reco1和Reco2，限制性内切酶位点Rest1；优选地，所述接受载体p32RR按照Rest1
‑
Reco1
‑
Reco2的位置排列；所述接头供体载体pP1dor包含：与所述接受载体p32RR相同的特异重组位点：Reco1，与所述接受载体p32RR相同的限制性内切酶位点Rest1，以及限制性内切酶位点Rest2；优选地，所述接头供体载体pP1dor按照Rest1
‑
Reco1
‑
Rest2的位置排列；所述基因供体载体pGedor包含：与Reco1和Reco2发生不可逆重组的对应位点Reco1
’
和Reco2
’
，与所述接受载体p32RR相同的特异重组位点Reco2，限制性内切酶位点Rest2，以及多克隆位点MCS；优选地，所述基因供体载体pGedor按照Reco1
’‑
Rest2
‑
Reco2
‑
MCS
‑
Reco2
’
的位置排列。2.根据权利要求1所述的多基因载体系统，其特征在于：所述接受载体p32RR还包含：阳性克隆筛选标记基因p1，抗性基因p3和引物结合位点F1；优选地，所述接受载体p32RR按照F1
‑
Rest1
‑
Reco1
‑
p3
‑
p1
‑
Reco2的位置排列；优选地，所述引物结合位点F1为接受载体p32RR的Reco1上游选取的一段在所述接受载体中唯一的核苷酸序列；优选地，所述接受载体p32RR还包含：不同于接头供体载体pP1dor和基因供体载体pGedor的抗性标记基因p2。3.根据权利要求2所述的多基因载体系统，其特征在于：所述接头供体载体pP1dor还包含：抗性基因p3，阳性克隆筛选标记基因p1；优选地，所述接头供体载体pP1dor按照Rest1
‑
Reco1
‑
p3
‑
p1
‑
Rest2的位置排列；优选地，所述接头供体载体pP1dor包含引物结合位点R3，所述引物结合位点R3为接头供体载体pP1Dor的Rest2上游选取的一段在所述接头供体载体pP1dor中唯一的核苷酸序列；优选地，所述接头供体载体pP1dor包含不同于接受载体p32RR的抗性标记基因p2。4.根据权利要求3所述的多基因载体系统，其特征在于：所述基因供体载体pGedor的MCS序列两端分别融合CaMV 35S和NosT；进一步为：5
’
端融合CaMV 35S，3
’
端融合NosT；优选地，所述基因供体载体pGedor按照Reco1
’‑
Rest2
‑
Reco2
‑
CaMV 35S
‑
MCS
‑
NosT
‑
Reco2
’
；优选地，所述基因供体载体pGedor还包含：不同于接受载体的抗性标记基因p2；优选地，所述基因供体载体pGedor还包含：引物结合位点R2；优选地，所述引物结合位点R2由插入MSC的目的基因决定；进一步优选地，所述引物结合位点R2为目的基因中选取的一段在所述基因供体载体pGedor中唯一的核甘酸序列。5.根据权利要求4所述的多基因载体系统，其特征在于：所述Reco1和Reco2为：attP1和attP2；或attR1和attR2；优选地，所述attR1的序列如SEQ ...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜虎，尹艳，吴廷全，王瑞，和婷婷，姚春鹏，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蔬菜研究所，
类型：发明
国别省市：
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