纤维蛋白片的制造方法技术

纤维蛋白片的制造方法，是在纤维蛋白凝胶中含有选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片的制造方法，包括：工序1，在由明胶水凝胶形成的基材表面上，滴加含有选自细胞和药剂中的至少1种以及血纤蛋白原的血纤蛋白原溶液；工序2，在上述基材表面上的上述血纤蛋白原溶液中添加凝血酶；工序3，使支撑膜与添加了上述凝血酶的血纤蛋白原溶液的上表面接触而载置该支撑膜；工序4，在上述基材与上述支撑膜之间，通过血纤蛋白原与凝血酶的反应，而形成在纤维蛋白凝胶中含有上述选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片；以及工序5，在上述明胶水凝胶的熔解温度以上的温度使上述基材熔解，将被上述支撑膜支撑着的上述纤维蛋白片从上述基材分离。分离。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】纤维蛋白片的制造方法


[0001]本专利技术涉及纤维蛋白片，更详细而言，涉及在纤维蛋白凝胶中含有选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片的制造方法。

技术介绍

[0002]在再生医疗领域中，从补充失去的脏器功能的观点考虑，对将细胞构建成3维组织、脏器而进行移植的治疗方法期待提高了(例如，Kawamura M.et al.，Circulation，2012；126：S29
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37(非专利文献1)，Miyagawa S.et al.，Current Gene Therapy，2016，Vol.16，No.1，p.5
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13(非专利文献2))。在3维组织、脏器的构建中，为了获得更好的治疗效果，也需要制作包含达到数层的充分量的细胞的组织。因此近年来，研究了使用3D打印机将细胞叠层化的Layer by Layer法(LbL法)(例如，Takagi D.et al.，Ricoh Technical Report，2016，No.41，p.118
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127(非专利文献3))、制作纳米纤维而在其上接种细胞的方法(例如，Li J.et al.，Stem Cell Reports，2017，Vol.9，1
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14，p.1546
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1559(非专利文献4))、制作特殊的模并对其接种上述生物体亲和性材料和细胞的方法(Nakane T.et al.，Scientific Report，2017，7：45641(非专利文献5)，Gao L.et al.，Circulation，2018；137：1712
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1730(非专利文献6)，Shadrin IY.et al.，Nature Communications，2017；8：1825(非专利文献7))等。
[0003]然而，对于上述LbL法，需要可以接种细胞的特殊的3D打印机，对于上述使用纳米纤维的方法，需要制作该纳米纤维的装置、在接种后直到细胞充分植入为止的时间，对于上述使用特殊的模的方法，需要该特殊的模的制作和将细胞在模中培养的时间，——对于这些现有方法，具有需要特殊且昂贵的装置、时间这样的问题。
[0004]此外，在再生医疗领域，已知为了将组织再生而在病灶部、缺损部使用含有细胞的细胞片的细胞补充疗法，进一步也研究了将该细胞片三维叠层而构建上述3维组织、脏器，用于移植、药物开发研究等。相关地，已知在外科手术中，为了补缀/增强切开部和/或病变除去后的组织缺损部而使用由生物体亲和性材料形成的片，也已知使该片进一步含有用于治疗的药剂而制成药剂片。作为这些细胞片、药剂片的基材(支架)、上述生物体亲和性材料，广泛已知纤维蛋白、胶原、和聚乳酸等。其中，由纤维蛋白形成的纤维蛋白凝胶具有通过组织胶合性而作为生物体粘接剂也发挥作用这样的优点，但另一方面，由于为糊状，因此如果为了使操作比较容易而使纤维蛋白的浓度浓，则使所含有的细胞生存变得困难。相反，如果将纤维蛋白稀释直到细胞可以生存的浓度为止，则不易维持凝胶的形状，因此操作变得困难。进一步，由于粘接性强，因此具有在细胞片的回收时对细胞带来损伤，或难以制造/维持均匀且任意形状的细胞片这样的问题。此外，假定今后的细胞片、药剂片等的制造采用装置的自动化成为主流，从装置的维护性的提高、小型化等观点考虑，预想要求更简便的制造方法。
[0005]现有技术文献
[0006]非专利文献
[0007]非专利文献1：Kawamura M.et al.，Circulation，2012；126：S29
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37
[0008]非专利文献2：Miyagawa S.et al.，Current Gene Therapy，2016，Vol.16，No.1，p.5
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13
[0009]非专利文献3：Takagi D.et al.，Ricoh Technical Report，2016，No.41，p.118
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127
[0010]非专利文献4：Li J.et al.，Stem Cell Reports，2017，Vol.9，1
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14，p.1546
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1559
[0011]非专利文献5：Nakane T.et al.，Scientific Report，2017，7：45641
[0012]非专利文献6：Gao L.et al.，Circulation，2018；137：1712
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1730
[0013]非专利文献7：Shadrin IY.et al.，Nature Communications，2017；8：1825

技术实现思路

[0014]专利技术所要解决的课题
[0015]本专利技术是鉴于上述现有技术所具有的课题而提出的，其目的是提供即使纤维蛋白浓度为细胞能够生存的程度的低浓度，也能够在抑制对细胞和药剂带来的损伤的同时，均匀并且以任意的形状简便地制造的在纤维蛋白凝胶中含有选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片的、纤维蛋白片的制造方法。
[0016]用于解决课题的方法
[0017]本专利技术者们对于在纤维蛋白凝胶中含有选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片的制造方法，为了达到上述目的而反复进行了深入研究，结果发现，通过在由明胶水凝胶形成的基材表面上，滴加含有上述细胞和/或药剂以及血纤蛋白原的血纤蛋白原溶液，接着，在上述基材表面上在上述血纤蛋白原溶液中添加凝血酶而制成纤维蛋白前体液，使支撑膜与其上表面接触而载置该支撑膜，从而可以不使用涂开这样的可能对细胞带来机械损伤的操作，而将上述纤维蛋白前体液在上述基材和上述支撑膜的均匀的面间通过表面张力而摊开，以及通过血纤蛋白原与凝血酶的反应，从而可以均匀地形成上述纤维蛋白片。进一步发现，通过在使上述纤维蛋白片形成后，在上述明胶水凝胶的熔解温度以上的温度使上述基材熔解，从而无论上述纤维蛋白片中的纤维蛋白浓度如何，即使该浓度为细胞能够生存的程度的低浓度，也可以将上述纤维蛋白片与上述基材容易地分离。进一步也发现，通过调整上述支撑膜的形状而能够容易地获得任意的形状的纤维蛋白片，从而完成了本专利技术。
[0018]即，本专利技术包含以下方案。
[0019][1][0020]一种纤维蛋白片的制造方法，是在纤维蛋白凝胶中含有选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片的制造方法，包括下述工序：
[0021]工序1，在由明胶水凝胶形成的基材表面上，滴加含有选自细胞和药剂中的至少1种以及血纤蛋白原的血纤蛋白原溶液；
[0022]工序2，在上述基材表面上的上述血纤蛋白原溶液中添加凝血酶；
[0023]工序3，使支撑膜与添加了上述凝血酶的血纤蛋白原溶液的上表面接触而载置该支撑膜；
[0024]工序4，在上述基材与上述支撑膜之间，通过血纤蛋白原与凝血酶的反应，而形成在纤维蛋白凝胶中含有上述选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片；以及
[0025本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种纤维蛋白片的制造方法，是在纤维蛋白凝胶中含有选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片的制造方法，包括下述工序：工序1，在由明胶水凝胶形成的基材表面上，滴加含有选自细胞和药剂中的至少1种以及血纤蛋白原的血纤蛋白原溶液；工序2，在所述基材表面上的所述血纤蛋白原溶液中添加凝血酶；工序3，使支撑膜与添加了所述凝血酶的血纤蛋白原溶液的上表面接触而载置该支撑膜；工序4，在所述基材与所述支撑膜之间，通过血纤蛋白原与凝血酶的反应，而形成在纤维蛋白凝胶中含有所述选自细胞和药剂中的至少1种的纤维蛋白片；以及工序5，在所述明胶水凝胶的熔解温度以上的温...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐村高明，宫川繁，泽芳树，横山淳也，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：