一种敲除FUT8基因的方法技术

本发明专利技术公开一种敲除FUT8基因以提高抗体ADCC活性的方法。利用CRISPR/Cas9技术编码CHO细胞的FUT8基因，得到FUT8基因沉默的CHO细胞。通过对工程化细胞表达抗体的理化性质及生物活性检测：糖型检测结果表明工程化细胞表达的抗体的岩藻糖完全消除，以曲妥珠单抗为对照，工程化细胞表达的完全无岩藻糖抗体与FcγRs抗原亲和力提高20倍，ADCC效应提高19倍。ADCC效应提高19倍。

【技术实现步骤摘要】
一种敲除FUT8基因的方法


[0001]本专利技术涉及生物领域，特别提供了一种敲除FUT8基因以提高抗体ADCC活性的方法。

技术介绍

[0002]ADCC(antibody dependent cellular cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用)是指由NK(natural killer)细胞引发的一系列免疫反应，NK细胞通过FcγRIII受体与抗体分子恒定区(Fc)结合，然后通过穿孔素和颗粒酶在靶细胞表面引起细胞降解和引发细胞凋亡。已有研究表明在IgG抗体的Fc片段CH2结构域Asn297部位的糖链结构去除岩藻糖时，可以增强NK细胞的FcγRIIIa与IgG抗体的Fc片段之间的结合力，从而增强抗体的ADCC效应。
[0003]现有研究也表明，免疫细胞表面的Fc受体具有基因多态性，且这些基因多态性与曲妥珠单抗临床客观反应率(ORR)和无进展生存期(PFS)密切相关。IgG Fc受体最重要的基因多态性为CD16a，根据其158位上氨基酸是苯丙氨酸(Phe，F)或颉氨酸(Val，V)，可以分为158V/V、158V本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种敲除FUT8基因的方法，其特征在于，所述方法包括：利用CRISPR/Cas9技术，针对CHO细胞FUT8基因的exon1和exon7区域各设计一对sgRNA，构建FUT8敲除载体质粒1和质粒2；将质粒1和质粒2转染进CHO细胞，敲除CHO细胞中的FUT8基因，得到FUT8基因沉默的稳定工程化细胞。2.根据权利要求1所述的敲除FUT8基因的方法，其特征在于，所述CHO细胞表达抗体为抗HER2抗体、抗CD20抗体、抗CD19抗体、抗EGFR抗体。3.根据权利要求2所述的敲除FUT8基因的方法，其特征在于，所述CHO细胞表达的抗HER2抗体为曲妥珠单抗。4.根据权利要求3所述的敲除FUT8基因的方法，其特征在于，所述曲妥珠单抗具有SEQ ID N0.1所示的重链和SEQ ID N0.2所示的轻链。5.根据权利要求1至4中任一项所述的敲...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜晓玲，周冲，吴崇兵，高超，马昀，肖哲媛，
申请(专利权)人：盛禾中国生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：