本发明专利技术提供一种定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条及其制备方法，其包括底板和依次搭载在底板上的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，样本垫上封闭有鼠抗人红细胞抗体，结合垫上喷涂有PLA2R荧光微球偶联物和兔IgG荧光微球偶联物，硝酸纤维素膜上包被有鼠抗人IgG抗体作为检测线，硝酸纤维素膜上还包被有羊抗兔IgG作为质控线。本发明专利技术的荧光免疫层析试纸条灵敏度和准确度高，所需临床样本用量极少，且操作简单，仅需一台荧光免疫分析仪即可实现信号的检测及浓度值转换。分析仪即可实现信号的检测及浓度值转换。
【技术实现步骤摘要】
一种定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条及其制备方法
[0001]本专利技术涉及免疫荧光检测
，具体涉及一种定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条及其制备方法。
技术介绍
[0002]磷脂酶A2受体(PLA2R)是一种跨膜糖蛋白，归属于甘露醇受体家族，其分子质量为185KD，最早发现于人类正常足细胞中，主要的表达是在肾小球足细胞中。特发性膜性肾病患者血清抗PLA2R抗体与PLA2R抗原结合，二者构成原位免疫复合物沉积于肾小球基底膜，引发了足细胞的损伤、肾小球基底膜的增厚和肾小球通透性的转变等一系列变化而致病，因此，临床上对肾组织PLA2R的检测对于膜性肾病特别是特发性膜性肾病的诊断、鉴别诊断、病情评估、疗效评价和预后具有重要作用。
[0003]对于膜性肾病的诊断，目前常用的依据临床表现和肾脏穿刺活检。其中肾脏穿刺活检是一种有创式的诊断方法，具有一定的危险性，对操作人员和环境、设备的要求比较高；而根据临床表现诊断膜性肾病的过程则对医生的经验要求较高，并且同样需要组织病理学的辅助验证。因此，开发一种可以精确定量检测抗PLA2R抗体的检测试剂，对于临床上诊断膜性肾病尤其是特发性膜性肾病具有重要意义。
[0004]目前临床上比较认可的PLA2R检测方法主要是采用欧蒙公司的间接免疫荧光法试剂盒测试血清中抗PLA2R抗体含量，但该试剂盒的操作方法比较复杂，检测周期长，且对检测人员的技术要求较高，该方法无法满足快速准确的检测抗PLA2R抗体含量，局限性较多。
[0005]现有专利CN104849452A在结合垫上喷涂抗人IgG抗体耦联的量子点，硝酸纤维膜上包被PLA2R抗原作为检测线，存在灵敏度不够高，检测结果不太准确的问题。现有专利CN111198273A也是采用抗人IgG标记、PLA2R抗原包被的形式，同样存在灵敏度不够高，检测结果不太准确的问题。现有专利CN111413506A设有两个结合垫，结构较为复杂，量产化难度高，而且其需要将PLA2R生物素化，操作复杂，损耗原料，同时也不能保证生物素化的PLA2R抗原与偶联SA的荧光微球100％反应，易造成信号损失。
[0006]因此，如何在保证试纸条结构简单，制备方法简单，能够量产化的前提下，提高其灵敏度、检测结果准确性以及缩短检测时间成为研究的重点。
技术实现思路
[0007]本专利技术的目的是提供一种操作简单、检测便捷，灵敏度高且可实现准确定量的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条。
[0008]本专利技术的另一目的是提供所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法。
[0009]本专利技术的另一目的是提供含有所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条的抗PLA2R抗体定量检测系统。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0011]一种定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条，所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条包括底板和依次搭载在所述的底板上的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，所述的样本垫上封闭有鼠抗人红细胞抗体，所述结合垫上喷涂有PLA2R荧光微球偶联物和兔IgG荧光微球偶联物，所述硝酸纤维素膜上包被有鼠抗人IgG抗体作为检测线，所述硝酸纤维素膜上还包被有羊抗兔IgG作为质控线。
[0012]优选地，所述的荧光微球为铕螯合荧光微球。
[0013]优选地，所述的荧光微球的表面带有修饰基团，所述的修饰基团为氨基和/或羧基；或，所述的荧光微球为经N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯和/或1
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺活化的荧光微球。氨基或羧基修饰的荧光微球相较于传统的胶体金颗粒或有机荧光颗粒，具有可定量、灵敏度高、稳定性和重复性好等优势。
[0014]优选地，所述的荧光微球的直径为0.1～0.3μm。
[0015]优选地，所述的荧光微球的激发波长为320～350nm，所述的荧光微球的发射波长为600～620nm。
[0016]优选地，所述的PLA2R荧光微球偶联物中的PLA2R为天然PLA2R蛋白和/或重组PLA2R蛋白。所述的重组PLA2R蛋白包括通过基因重组生产出的全长PLA2R蛋白或PLA2R片段。
[0017]优选地，所述的样本垫与结合垫的材质为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。
[0018]所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：
[0019](1)将鼠抗人红细胞抗体封闭到样本垫上；
[0020](2)将PLA2R蛋白与荧光微球偶联得到PLA2R荧光微球偶联物；将兔IgG抗体与荧光微球偶联得到兔IgG荧光微球偶联物，将所述的PLA2R荧光微球偶联物和所述的兔IgG荧光微球偶联物混合后喷涂在结合垫上；
[0021](3)在硝酸纤维素膜上包被鼠抗人IgG抗体作为检测线；在硝酸纤维素膜上包被羊抗兔IgG抗体作为质控线；
[0022](4)在PVC底板上依次搭载步骤(1)中制备的样本垫、步骤(2)中制备的结合垫、步骤(3)中制备的硝酸纤维素膜以及吸水纸，然后裁成一定宽度的试纸条并装入卡壳中。
[0023]优选地，所述的步骤(1)具体为：将样本垫浸润到含有鼠抗人红细胞抗体的封闭缓冲液中，取出后置于湿度小于30％、温度为18～28℃的环境中，以30～60℃条件下烘干即可，
[0024]所述的封闭缓冲液为磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液或柠檬酸缓冲液，
[0025]优选地，所述的封闭缓冲液中鼠抗人红细胞抗体的浓度为0.01～0.5mg/mL。
[0026]优选地，所述的步骤(2)具体为：将PLA2R蛋白和荧光微球在偶联缓冲液中偶联得到PLA2R荧光微球偶联物，将兔IgG抗体和荧光微球在偶联缓冲液中偶联得到兔IgG荧光微球偶联物，将所述的PLA2R荧光微球偶联物和所述的兔IgG荧光微球偶联物混合成喷金液，用喷金仪将喷金液均匀喷涂到结合垫上，然后置于湿度小于30％、温度为18～28℃的环境中，以30～60℃条件下烘干即可，
[0027]所述的偶联缓冲液为磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液或柠
檬酸缓冲液，
[0028]所述的PLA2R蛋白在偶联缓冲液中的浓度为0.01～0.5mg/mL，
[0029]所述的兔IgG抗体在偶联缓冲液中的浓度为0.01～0.5mg/mL，
[0030]所述的荧光微球在偶联缓冲液中的浓度为0.01～0.5mg/mL mg/mL，
[0031]所述的喷金液中PLA2R荧光微球偶联物的浓度为0.01～0.5mg/mL，
[0032]所述的喷金液中兔IgG荧光微球偶联物的浓度为0.01～0.5mg/mL。
[0033]优选地，所述的步骤(3)具体为：分别将含有鼠抗人IgG抗体的包被溶液和含有羊抗兔IgG抗体本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条包括底板和依次搭载在所述的底板上的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，所述的样本垫上封闭有鼠抗人红细胞抗体，所述的结合垫上喷涂有PLA2R荧光微球偶联物和兔IgG荧光微球偶联物，所述的硝酸纤维素膜上包被有鼠抗人IgG抗体作为检测线，所述的硝酸纤维素膜上还包被有羊抗兔IgG作为质控线。2.根据权利要求1所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的荧光微球为铕螯合荧光微球。3.根据权利要求1所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的荧光微球的表面带有修饰基团，所述的修饰基团为氨基和/或羧基；或，所述的荧光微球为经N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯和/或1
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺活化的荧光微球。4.根据权利要求1所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的荧光微球的直径为0.1～0.3μm，所述的荧光微球的激发波长为320～350nm，所述的荧光微球的发射波长为600～620nm。5.根据权利要求1所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的PLA2R荧光微球偶联物中的PLA2R为天然PLA2R蛋白和/或重组PLA2R蛋白；和/或，所述的样本垫与结合垫的材质为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。6.一种如权利要求1至5中任一项所述的定量检测抗PLA2R抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：(1)将鼠抗人红细胞抗体封闭到样本垫上；(2)将PLA2R蛋白与荧光微球偶联得到PLA2R荧光微球偶联物；将兔IgG抗体与荧光微球偶联得到兔IgG荧光微球偶联物，将所述的PLA2R荧光微球偶联物和所述的兔IgG荧光微球偶联物混合后喷涂在结合垫上；(3)在硝酸纤维素膜上包被鼠抗人IgG抗体作为检测线；在硝酸纤维素膜上包被羊抗兔IgG抗体作为质控线；(4)在PVC底板上依次搭载步骤(1)中制备的样本垫、步骤(2)中制备的结合垫、步骤(3)中制备的硝酸纤维素膜以及吸水纸，然后裁成一定宽度的试纸条并装入卡壳中。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述的步骤(1)具体为：将样本垫浸润到含有鼠抗人红细胞抗体的封闭缓冲液中，取出后置于湿度小于30％、温度为18～28℃的环境中，以30～60℃条件下烘干即可，所述的封闭缓冲液为磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MES缓冲...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐国新，姚辉，
申请(专利权)人：张家港市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：
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