一种胶质细胞和神经元共培养方法技术

本发明专利技术公开了一种胶质细胞和神经元共培养方法，涉及细胞培养技术领域，解决现有的接触式共培养材料来源少、培养成本高、培养过程复杂且存活率低的技术问题；主要包括以下步骤：从成年鼠或老年鼠的脑组织中采集胶质细胞和神经元，合并接种，接种前期不换液，当观察到清晰的悬浮细胞球时，吸出一半悬浮细胞及培养基到另一孔中，用完全培养基补足，再继续培养，连续分配悬浮细胞及培养基，直到细胞密度达到接触式共培养要求，经过25

【技术实现步骤摘要】
一种胶质细胞和神经元共培养方法


[0001]本专利技术涉及细胞生物学
，更具体的是涉及细胞培养


技术介绍

[0002]现有的接触式共培养常常需要将两种细胞分别抽提，分别培养后再合并共培养，过程复杂且混合后存活率低，且需要以乳鼠或胎鼠为材料，材料来源少，细胞培养成本较高，产量相对较低。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于：为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种胶质细胞和神经元共培养方法。
[0004]本专利技术为了实现上述目的具体采用以下技术方案：
[0005]一种胶质细胞和神经元共培养方法，包括以下步骤：
[0006]S1：从成年鼠或老年鼠的脑组织中提取神经元及胶质细胞，通过梯度密度离心法分离获得第二层细胞和第三层细胞，将细胞沉淀用完全培养基重悬后接种到孔板中；
[0007]S2：接种第1
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3天不换液，也不做任何处理；
[0008]S3：3天后可观察到清晰的悬浮细胞球，开始吸出一半培养基及其中细胞到另一孔中，用完全培养基对两孔培养液进行补足本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶质细胞和神经元共培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：从成年鼠或老年鼠的脑组织中提取神经元及胶质细胞，通过梯度密度离心法分离获得第二层细胞和第三层细胞，将细胞沉淀用完全培养基重悬后接种到孔板中；S2：接种第1
‑
3天不换液，也不做任何处理；S3：3天后可观察到清晰的悬浮细胞球，开始吸出一半培养基及其中细胞到另一孔中，用完全培养基对两孔培养液进行补足，再继续培养2天。S4：第5天观察细胞数量，如果神经球细胞较多悬浮，再次吸出一半液体及悬浮细胞到一个空孔中，用S3的方法补足培养液；S5：连续分配悬浮细胞及培养基2
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3次后，细胞密度达到接触式共培养要求，观察细胞生长状态，经过25
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30天的培养，胶质细胞和神经元形成接触式共培养，较为稳定的形成神经元网络和胶质背景。2.根据权利要求1所述的一种胶质细胞和神经元共培养方法，其特征在于，培养在37℃二氧化碳培养箱内进行。3.根据权利要求1所述的一种胶质细胞和神经元共培养方法，其特征在于，接种时，2ml细胞悬液平均接种到6孔中。4.根据权利要求1所述的一种胶质细胞和神经元共培养方法，其特征在于，所述完全培养基包括：25ml NeurobasalA、0.5ml B27、Glutamax和庆大霉素，其中Glutamax终浓度为200mM，庆大霉素终浓度为10mg/ml)。5.根据权利要求1所述的一种胶质细胞和神经元共培养方法，其特征在于，S1包括以下步骤：S11：将成年鼠或老年鼠麻醉消毒，解剖，将其大脑取出，大脑中的海马体放入冰上带有HABG的盘子中进行运输并称重，剥离海马后两侧大脑半球暴露的皮质取出称重，放入4℃含有HABG的试管中；S12：将装有...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳洁，傅晓丽，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：