一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法技术

本发明专利技术提供了一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法，涉及代谢组学技术领域。本发明专利技术提供肝癌微血管侵犯的阳性血清样本和阴性血清样本；测定所述阳性血清样本和阴性血清样本的1HNMR谱图，以1HNMR谱图中的全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为自变量，以肝癌微血管侵犯阳性或阴性作为观察变量，构建正交偏最小二乘判别分析(OPLS

【技术实现步骤摘要】
一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法


[0001]本专利技术涉及代谢组学
，特别涉及一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法。

技术介绍

[0002]肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球最常见恶性肿瘤之一。尽管手术切除、局部消融和综合治疗方案不断优化，分子靶向治疗药物也相继问世，但肝癌的病死率仍居高不下。一方面由于肝癌早期症状不明显，确诊时大部分已是晚期，患者几乎丧失了手术根治或移植的可能性；另一方面，患者术后复发率和转移率极高。
[0003]微血管侵犯(microvascular invasion，MVI)被认为是肝癌复发的最危险因素之一，预示着肿瘤存在高侵袭性生物学行为。MVI是指在显微镜下于内皮细胞衬覆的脉管腔内见到癌细胞巢团，以门静脉分支为主(含包膜内血管)。病理分级方法：M0：未发现MVI；M1(低危组)：≤5个MVI，且发生于近癌旁肝组织；M2(高危组)：＞5个MVI，或MVI发生于远癌旁肝组织。
[0004]目前，MVI的发现仍主要依赖于手术后病理学检查，如果能在术前预测MVI的存在并在早期给予积极干预，势必将改善患者预后。因此，术前预测MVI对提高HCC患者远期生存率及降低术后复发率具有重要意义。目前尚未有快速鉴别MVI的方法的报道。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法及肝癌微血管侵犯预测值的测试方法。采用本专利技术构建的模型能够实现肝癌微血管侵犯的快速鉴别。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法，包括以下步骤：
[0008]提供肝癌微血管侵犯的阳性血清样本和阴性血清样本；
[0009]测定所述阳性血清样本和阴性血清样本的1HNMR谱图，以所述1HNMR谱图中的全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为自变量，以肝癌微血管侵犯阳性或阴性作为观察变量，采用正交偏最小二乘辨别分析法进行有监督的聚类分析，得到OPLS
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DA模型。
[0010]优选地，所述测定阳性血清样本和阴性血清样本的1HNMR谱图的方法包括以下步骤：
[0011](1)分别将所述阳性血清样本和阴性血清样本与甲醇和磷酸盐缓冲液混合，将所得混合液依次进行涡旋振荡、超声和离心，取上清液浓缩至干，得到血清代谢物；
[0012](2)将所述血清代谢物与氘代试剂混合，将所得混合液依次进行涡旋振荡、超声和离心，得到上清液；取所述上清液进行核磁共振检测，得到1HNMR谱图；所述氘代试剂中加入四甲基硅烷作为内标物。
[0013]优选地，所述阳性血清样本和阴性血清样本与甲醇的体积比分别为1:4～20。
[0014]优选地，所述磷酸盐缓冲液的pH值为2～8，浓度为0.05～3mol/L；所述阳性血清样本和阴性血清样本与磷酸盐缓冲液的用量比分别为1.0mL:50～200μL。
[0015]优选地，所述步骤(1)中涡旋振荡的时间为3～15min；所述超声的时间为5～60min；所述离心的速度为8000～13000rpm，时间为5～20min；所述浓缩的方法为旋转蒸发，所述旋转蒸发的温度为40～55℃，时间为3～6h。
[0016]优选地，所述步骤(2)中核磁共振检测的条件包括：5mm多核宽带观测探头，观测频率为600.13MHz，图谱宽度SW为19.8ppm，图谱的中心点O1P为4～10ppm，扫描次数NS为64～256次。
[0017]优选地，所述胆汁酸特征峰的化学位移为0.70～0.74ppm。
[0018]优选地，所述自变量的数量为10K～60K。
[0019]优选地，所述OPLS
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DA模型的正交变量组分为3～10，R2Y为0.6～0.9，Q2为0.2～0.6。
[0020]本专利技术还提供了一种肝癌微血管侵犯预测值的测试方法，包括以下步骤：
[0021]测定待测血清样品的1HNMR谱图，以待测血清样品1HNMR谱图中的全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为输入因子，输入以上技术方案所述构建方法得到的OPLS
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DA模型中，计算预测值。
[0022]本专利技术提供了一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法，包括以下步骤：提供肝癌微血管侵犯的阳性血清样本和阴性血清样本，测定所述阳性血清样本和阴性血清样本的1HNMR谱图，以所述1HNMR谱图中的全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为自变量，以肝癌微血管侵犯阳性或阴性作为观察变量，采用正交偏最小二乘辨别分析法进行有监督的聚类分析，得到OPLS
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DA模型。采用本专利技术提供的构建方法得到的模型(即OPLS
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DA模型)能够对肝癌微血管侵犯阳性或阴性进行快速地鉴别，实现术前肝癌微血管侵犯的预测，对提高肝细胞癌患者远期生存率及降低术后复发率具有重要意义，尤其采用1HNMR全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为自变量，即采用胆汁酸代谢物1HNMR全谱校准的方法，不仅可以消除某些“鬼峰”对数据真实性的影响，还可实现一次检测可以获得血清代谢物的相对定量数据，无需进一步对具体代谢物进行鉴定和绝对定量，具有“整体性”(对含H的代谢物进行检测，没有偏向性)和“模糊性”(无需对具体的代谢物进行绝对定量)的特点，在保证准确性的同时大大降低了检测成本。本专利技术利用核磁共振氢谱技术结合常规的数据处理软件和数据建模软件即可进行模型的构建，构建方法简单，一次分析即可快速、准确地预测肝癌微血管侵犯阳性或阴性，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0023]图1为实施例1的M0样品组中编号为1的血清样本的原始1HNMR图谱和胆汁酸类特征峰校准后的1HNMR图谱，图1中(a)为原始1HNMR图谱，(b)为胆汁酸类特征峰校准后的1HNMR图谱；
[0024]图2为实施例1的M0样品组中编号为50和MVI样品组中编号为100的血清样本胆汁酸类特征峰校准后的1HNMR图谱，图1中，A为M0样品组中编号为50的血清样本胆汁酸类特征峰校准后的1HNMR图谱，B为MVI样品组中编号为100的血清样本胆汁酸类特征峰校准后的
1
HNMR图谱；
[0025]图3为实施例1中M0(编号1～55、105～109)与MVI(编号56～104、120～124)胆汁酸类特征峰校准的1HNMR全谱OPLS
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DA得分图；
[0026]图4为实施例1构建的OPLS
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DA模型进行200次置换检验(permutation test)结果图；
[0027]图5为实施例2中基于胆汁酸校准1HNMR全谱构建的OPLS
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DA模型预测未知样品图；
[0028]图6为实施例2中基于胆汁酸校准1HNMR全谱构本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肝癌微血管侵犯鉴别模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：提供肝癌微血管侵犯的阳性血清样本和阴性血清样本；测定所述阳性血清样本和阴性血清样本的1HNMR谱图，以所述1HNMR谱图中的全谱数据与胆汁酸特征峰的峰高或积分的比值作为自变量，以肝癌微血管侵犯阳性或阴性作为观察变量，采用正交偏最小二乘辨别分析法进行有监督的聚类分析，得到OPLS
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DA模型。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测定阳性血清样本和阴性血清样本的1HNMR谱图的方法包括以下步骤：(1)分别将所述阳性血清样本和阴性血清样本与甲醇和磷酸盐缓冲液混合，将所得混合液依次进行涡旋振荡、超声和离心，取上清液浓缩至干，得到血清代谢物；(2)将所述血清代谢物与氘代试剂混合，将所得混合液依次进行涡旋振荡、超声和离心，得到上清液；取所述上清液进行核磁共振检测，得到1HNMR谱图；所述氘代试剂中加入四甲基硅烷作为内标物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述阳性血清样本和阴性血清样本与甲醇的体积比分别为1:4～20。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH值为2～8，浓度为0.05～3mol/L；所述阳性血清样本和阴性血清样本与磷酸盐缓冲液的用量比分别为1.0mL:50～200μL。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：谢宝刚，程树群，张先超，金楠，蒋亚波，潘巍巍，魏远旺，
申请(专利权)人：嘉兴学院，
类型：发明
国别省市：